粘土矿物-蛋白质超薄膜的设计与生物催化性能研究.pdf

中国科学: 化学 2012 年 第42 卷 第7 期: 1 ~ 16 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 论 文 粘土矿物-蛋白质超薄膜的设计与生物催化性能 研究 * 苗世顶, 邱治国, 崔鹏 合肥工业大学化工学院, 安徽 230009 *通讯作者, E-mail: miaosd@ 收稿日期: 2011-06-27; 接受日期: 2011-08-29 doi: 10.1007/s11426-012-4689-4 摘要 随着生物芯片及生物大分子有序自组装技术的发展, 蛋白质-粘土矿物的超薄复合膜 关键词 (clay-protein ultrathin films, CPUFs)的制备在生物催化领域引起人们的广泛关注. 本文详述了蛋 蛋白质 粘土矿物 白质(溶解酵素、牛血清白蛋白、木瓜蛋白酶与精蛋白)与单片粘土(elementary sheet)矿物(钠化 超薄复合膜 皂石)形成单层或多层纳米薄膜复合物的吸附过程及二维分子自组装的制备工艺, 对交替层吸 设计 附(layer-by-layer, LbL)和Langmuir-Blodgett(LB)方法应用于CPUFs 的构筑分别进行了介绍, 并 生物催化 阐述了紫外可见分光光度计(UV-vis), 衰减全反射红外光谱(ATR-FTIR), X 射线衍射(XRD), 原 子力显微镜(AFM)和界面化学技术等手段对薄膜定性定量表征的研究方法及结果. 研究表 明, 在 CPUFs 的形成过程中, 静电相互作用是一个突出因素, 但不是唯一驱动力. 在利用 LB 技术构筑 CPUFs 的研究中, 我们发现即使在无表面活性剂分子的协助下, 水溶性蛋白质也能 够在粘土矿物稀溶液的界面上形成较为稳定的蛋白质-粘土矿物Langmuir 复合膜. 通过研究表 面压力与时间(-t) 的动力学曲线和表面压力对面积(-A) 的等温线, 实现了粘土矿物与蛋白分 子吸附过程即CPUFs 形成过程的实时监测, 并测定出CPUFs 中蛋白质含量(NS) 、蛋白质分子 堆积密度() 、单个蛋白质分子在粘土片层上的平均占位面积()及蛋白质在粘土层的饱和吸  附量等物理化学参数. 通过将界面化学测定结果、光谱学方法测定结果与粘土矿物体相溶液吸 附实验结果相比较, 发现LB 技术实现了单层粘土片(厚度约1.3 nm)的吸附与自组装, 证明界面 化学方法是定量化研究CPUFs 的一种有效手段. 通过将含有溶解酵素的CPUFs 膜用于流水池 反应器上进行生物活性检测, 考察了其在睾丸酮丛毛单胞菌生长发育过程中的催化性能, 结果 表明LZ 分子被锚固在CPUFs 上以后, 未发生明显的生物活性失活现象. 1 引言 分地克服这些限制[2]. 与自由态的蛋白酶相比, 固定 化的酶催化剂具有热与化学稳定性强[3] 、异相催化剂 在酶催化反应中, 由于自由态蛋白酶分子(蛋白 分离效率高等优势[4]; 在某些情况下, 蛋白质分子与 质, 酶类, 核酸) 的热稳定性较差, 且在使用过程中难 基底官能团的偶合作用能够提高催化剂的选择性, 以回收, 使蛋白酶催化剂的使用受到极大的限制[1], 增加其在有机表面与酶的反应速率[5]. 近年来, 随着 生物酶或蛋白质催化剂在载体表面的固定化可以部 生物芯片及生物大分子有序自组装技术的