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流式细胞术 flow cytometry,FCM;原理（流式细胞仪） 数据分析 应用 ;流式细胞术（flow cytometry，FCM）是以流式细胞仪为检测手段的，一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速、准确测量的新型分析技术和分选技术。;流式细胞术的特点;1. 概述;流式细胞仪常检测的细胞特性;2.流式细胞仪的基本结构：;由样本和鞘液组成 样本：待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的单抗对其染色 受清洁气体压力 从样品管进入流动室形成样本流 鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 ;;（3）数据处理系统;3.基本工作原理;流式细胞仪与显微镜的区别;(1).散射光的测定;前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度(0.5°～10°)向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。;;侧向散射光（side scatter, SS）：激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性—细胞内颗粒的复杂程度。;;荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。 每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。 选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。 线性放大器和对数放大器; 通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。;分选基本原理;流式细胞仪的数据处理;1、数据显示方式;单数据直方图 ( Histogram） ;双参数数据图;二维点图;二维等高图;二维等高图;假三维等高图;三参数直方图;2、数据分析;非参数法：对测量得到的分布形状不需要做任何假设，即采用无设定参数分析法。 逐点描图（或用手工，或用描图仪、计算机系统）是大家常用的数据分析的重要手段，可以用来了解数据的特性。 逐道比较工作量较大，但用直观法很容易发现明显的差异，特别是对照组和测试组。对照组和测试组的逐道比较往往可以减少许多不必要的误差和错误解释。;应用分类 ;应用分类 ;流式细胞仪的科研应用; 在细胞周期(G0，G1，S，G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白（CYCLIN）、Ki67、核增殖抗原（PCNA）等，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M, 用于肿瘤的早期诊断、肿瘤的良恶性判断、观察细胞的增殖状态及周期分布和疗效监测。 ;分析细胞周期 ;倍体分析;流式细胞术在肿瘤学中的应用：可以检测肿瘤细胞增殖周期、细胞凋亡、肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物，进行多药耐药行分析 流式细胞术在免疫学中的应用：可进行淋巴细胞及其亚群分析，淋巴细胞免疫分型，淋巴细胞活化，细胞因子、HLA．B27检测，AIDS诊断及治疗监控 流式细胞术在血液学中的应用：可进行白血病和淋巴瘤细胞检测，血小板活化，血小板相关疾病诊断，造血干细胞(cD34+)计数，白血病与淋巴瘤免疫分型，残余白血病细胞检测，网织红细胞计数，细胞移植交叉配型和免疫状态监测 ;肿瘤细胞表面标记;脑栓塞病人血小板活化检测;参考教材;Thank you