血片制作及染色概要1.pptVIP

* * 血片的染色（三）吉氏染液血片染色方法 单张血片染色：薄血膜经甲醇固定干燥后，用2%吉氏染液的稀释液1~2毫升，可用中性蒸馏水或缓冲液1~2毫升，加吉氏染液原液1~2滴，混合均匀后滴入血片标本血膜上，染色20~30分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。 将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染 液（98毫升的缓冲液或净水中加入2毫升吉氏染液原液，混匀）浸没血片，染色30分钟。然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将染色片插于晾片板上晾干，包装，待镜检（如果染色效果不理想时，得酌情增减染色时间和浓度）。 血片染色图示 * * * 疟原虫血片制作及染色技术 血片制作所需设备 载玻片 具有磨砂面，且规格是玻片宽度乘长度在25.2*75.2mm，厚度1mm~1.2mm为好。 推玻片 有专用的。但现在一般选择边缘光滑整齐的载玻片替代推玻片。 采血针 使用一次性的采血针。 玻片盒 木制/塑料均可以。 75%酒精棉球 用于采血部位的消毒。 记号笔/B2铅笔 用于载玻片上编写号码。 Whatman(沃特曼)903号；将滤纸切成10*2cm大小的纸片，以口径为1.2cm的大孔管，在滤纸上压出两个圆形印迹备用。 * * 载玻片的清洗 载玻片 用以涂制血膜的载玻片，必须清洁无油迹。有油迹的载玻片涂制的厚血膜容易脱落，薄血膜涂不均匀。 新玻片处理 应浸于有液态洗涤剂清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干后用干净柔软的棉巾擦亮备用。也可以95%的乙醇浸泡5~10分钟，再用纱布擦干擦亮备用。 旧玻片处理 用过的玻片浸泡洗涤剂溶液中1~2天或者浸泡于煮沸好的5%肥皂水中1~2小时，逐个擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂洗干净擦干擦亮。 洗净载玻片处理 每10~20张用白纸包好或者装原玻片盒里再放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 * * 取血部位及方法 取血部位及方法 取血部位以耳垂较为合适，也可在无名手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。 * * 采血时间 取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断疟疾的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时内取血，初发患者退热后常查不到疟原虫。 涂制血膜规则 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。 涂片顺序，先厚后薄；位置分配，血片自左向右：薄-厚-标签；推薄片用玻片短边。 制作厚血膜 制作薄血膜 * * 厚血膜血量及涂片方法 厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 * * 薄血膜血量及涂片法 薄血膜 取洁净的载玻片2张，1张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分刮取约1~1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25~35度夹角，待血液向两侧扩展约2厘米宽度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5厘米长）且边缘带有“舌状”的薄血膜。 厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4 -5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜 薄血膜再取一小滴血.将血置于离厚血膜适当的距离（0.5cm~0.7cm），将推片的边缘紧贴载玻片，轻轻上下移动，使血液沿边缘散开，然后匀速地向前推进，形成薄而平铺的薄血膜。 血片制作图示 厚血膜 薄血膜 制片流程图示 图1. 取血 图2. 涂制厚血膜 图3. 涂制薄血膜 图4. 推片沿玻片两侧向前推进 图5. 正确的推片姿势 * * 涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载玻片分为3等分（留出标签或磨砂面位置后的3等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均匀、边缘整齐。薄血膜涂在载玻片1/2至左1/3的中部位置，舌