浅析实验一酶催化蔗糖转化反应（~28学时）.docVIP

实验一 酶催化蔗糖转化反应（~28学时） 目的和要求 用旋光仪对酶催化蔗糖转化反应进行测定。 了解掌握蔗糖酶的制备和酶活力的测定。 学会米氏常数的测定。 实验原理 蔗糖转化反应 蔗糖 ＋ 水 ——→ 葡萄糖 ＋ 果糖 这个反应在H+或蔗糖酶的催化下可以很快的进行。蔗糖及其转化产物都有不对称的碳原子，它们都有旋光性，但是它们的旋光能力不同，所以可以利用体系在反应过程中旋光度的变化来描述反应进程。 溶液的旋光度与溶液中所含旋光物质的旋光能力、溶剂的性质、溶液的浓度、测量样品管的长度等均有关系。当其他条件不变时，旋光度(与反应物浓度C成线形关系，即 (＝kC 作为反应物的蔗糖是右旋性物质，其比旋光度为66.6；生成物的葡萄糖也是右旋性的物质，其比旋光度为52.5，但是果糖是左旋性物质，其比旋光度为－91.9。由于生成物中果糖左旋性比葡萄糖右旋性大，所以生成物呈现左旋性质。因此，随着反应的进行，体系的右旋角不断减小，反应到某一时刻，体系的旋光度可恰好等于零，而后就变成左旋，直到蔗糖完全转化，这时体系的左旋角达到最大值。 仪器和试剂 旋光仪1台 恒温槽1套 葡萄糖、果糖、蔗糖（均为分析纯） 醋酸－醋酸钠缓冲溶液 实验步骤 蔗糖酶的提取 取鲜酵母20 g于100 mL三角瓶中，加入1.6 g NaAc，搅拌15～20分钟后使团块液化，再加3 mL甲苯，混和后摇动10分钟，放在恒温箱