色质联用技术的方法、原理与应用(讲座).ppt

色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。而且也简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。 色谱质谱联用包括气相色谱质谱联用(GC-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS)，液质联用与气质联用互为补充，分析不同性质的化合物。 此外还有CE-MS，CEC-MS。 Comparison of ionization techniques Principle of ion trap MS/MS 3.飞行时间质量分析器(Time Of Flight Mass Analyser,  TOF) Mass measurement accuracy depends on resolution High resolution means better mass accuracy 常用的质谱谱库 用标准电离条件——电子轰击电离源，70eV电子束轰击已知纯有机化合物，将这些标准质谱图和有关质谱数据存贮在计算机的磁盘中就得到了质谱谱库，目前最常用的质谱谱库有以下一些： （1）NIST库 由美国国家科学技术研究所（National Institute of Science and Technology）出版，最新版本收有64K张标准质谱图。 （2）NIST／ EPA／NIH库 是由美国国家科学技术研究所（NIST）、美国环保局（EPA）和美国国立卫生研究院（NIH）共同出版，最新版本收有的标准质谱图超过129K张，约有107K个化合物及107K个化合物的结构式。 （3）Wiley库 有3种版本。第六版本的Wiley库收有标准质谱图230K张；第六版本的Wiley／NIST库收有标准质谱图275K张；Wiley选择库（Wiley Select Libraries）收有90K张标准质谱图。在Wiley库中同一个化合物可能有重复的不同来源的质谱图。 （4）农药库（Standard Pesticide Libraray） 内有 340个农药的标准质谱图。 （5）药物库（Pfleyer Druy Libraray） 内有 4370个化合物的标准质谱图，其中包括许多药物、杀虫剂、环境污染物及其代谢产物和它们的衍生化产物的标准质谱图。 （6）挥发油库（Essential Oil Libraray） 内有挥发油的标准质谱图。 1.LC-MS (ESI-离子阱)联用仪器结构示意图 2.LC-MS (APCI-四极杆)联用仪器结构示意图 液质联用的电喷雾(ESI) 电喷雾(ESI)的电离过程 大气压源子化技术 电喷雾(ESI) 化合物无需具有挥发性 是分析热不稳定化和物的首选方法 离子在溶液中以已生成 除了生成单电荷离子之外还可以生成多电荷离子 适用于分析极性化合物与生物大分子 大气压化学电离源(APCI) 化和物需具有一定的挥发性 化和物必需是热稳定的 离子在气态条件中生成 只生成单电荷离子 适用于分析弱极性与小分子化合物 ESI 和APCI的比较 3、大气压光致电离 (APPI) MALDI-TOF Mass Spectrometry 1、飞行时间质量分析器(Time Of Flight Mass Analyser, TOF) 二、LC-MS分析条件的选择 1.离子源的选择 适合ESI的样品类型： – 高极性化合物、蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子； – 胺类、季铵盐等； – 含杂原子化合物如氨基甲酸酯等 适合APCI的样品类型： – 弱极性/中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等 – 含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等 ESI不适合的化合物：极端非极性化合物如苯等； APCI不适合的化合物：非挥发性样品；热稳定性差的样品 2.正负离子模式的选择 正离子模式适合于碱性样品，可用乙酸（pH＝3-4）或甲酸（pH＝2-3）或三氟乙酸（pH1~2）对样品加以酸化。在pKa上降低 pH 2 。流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率 负离子模式适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。在pKa上增加pH 2。 有些酸碱性并不明确的化合物，可优先选用ESI正离子模式进行测定。 3.流动相的选择 常用的溶剂和缓冲液 a 水、乙腈及甲醇 LC-MS理想的溶剂 b 乙酸和甲酸 可降低LC流动相的pH值以提高分离度 c 氢氧化铵/氨溶液 可提高LC流动相的pH值 d 乙酸铵 是一种挥发性盐，用于具有缓冲盐的流动相，并改善色谱分离而不影响MS的性能。最大浓度不超过0.1mol/L。 不适合的溶剂和缓冲液 a 不挥发的盐 b 表面活性剂/洗涤剂 c 无机酸 其它溶剂和调节剂 a 异丙醇、2-甲氧基乙醇及乙醇等 b 三氟醋酸（TFA）常用于LC-MS分