细胞与遗传学基础实验指导-生物遗传学教研室.DOC

绪 言 一、实验课目的 本学科是一门实验性很强的学科，其实验课教学是整个教学的重要组成部分。目的有如下几方面： （一） 验证理论。通过对理论课所学理论的验证，进一步加深对教学内容的理解、巩固和提高。 （二） 通过基本技能的训练以及对实验结果的观察分析，使学生了解并掌握有关的实验技术方法，进而培养学生动手实践、观察分析和解决问题的能力。 （三） 培养学生实事求是的科学态度和科学的思维方法，为其后续课的实验及今后的医学研究打下基础。（一） 学生在实验前应认真预习实验指导及教材中与实验有关的章节，对实验课的原理、内容及方法有初步的了解。 （二） 在实验中要认真操作、仔细观察分析并及时做好记录。 （三） 要注重动手能力的培养。 （四） 在实验中要注重基本技能的训练及实验仪器、器械的使用方法。对基本的实验技能要反复训练直至基本掌握。 （五） 实验结束后，要根据实验过程中的记录和实验指导的要求，实事求是认真写好实验报告，不得抄书或借阅他人的报告参考。 （一） 遵守实验纪律，不迟到、不早退或无故缺席。 （二） 进入实验室要穿好白大衣。 （三） 进实验室后要按学号对号入座，不能随意更换座位。要保持肃静。 （四） 要严肃认真地进行实验。实验期间不得进行任何与实验无关的活动。 （五） 实验中各种用品使用后应放回原处。示教标本应按顺序观察，不能任意移动标本，以免妨碍他人观察。 （六） 要爱护仪器、标本和器械，如有损坏，应及时报告老师，以便修理或更换。损坏仪器、器械和标本者应按规定进行赔偿。 （七） 要注意节约实验材料、药品和水、电等。 （八） 保持实验室内清洁整齐。实验废物及纸屑应放到指定地点，不得随意乱丢。实 四、实验教学的内容 实验顺序 实 验 内 容 实验一 普通光学显微镜的结构和使用 实验二 动物细胞的基本形态观察和显微测量 实验三 细胞组分的化学反应 实验四 线粒体的活体染色 实验五 液泡系的活体染色 实验六 细胞膜通透性的观察 实验七 细胞计数 实验八 细胞超微结构电镜照片的识别 实验九 细胞分裂 实验十 细胞的原代和传代培养 实验十一 细胞融合 第一次实验： 普通光学显微镜的结构和使用 动物细胞的基本形态观察和显微测量 第二次实验： 细胞组分的化学反应 线粒体的活体染色 液泡系的活体染色 第三次实验： 细胞膜通透性的观察 细胞计数 第四次实验： 细胞超微结构电镜照片的识别 细胞分裂 细胞的原代和传代培养录像 常用实验动物的了解和解剖器械的使用 一、常用实验动物 常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠、大白鼠、豚鼠、猫、兔和狗等。在医学实验中，常常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究。例如，蟾蜍可以用于观察离体心脏搏动情况的实验，小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等)，猫常用于测定脑内电位的实验，而狗是局解手术中常用的实验动物。 在我们细胞生物学实验中，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。 蟾蜍 蟾蜍是两栖类动物，由于其取材方便，常用于各种实验。其细胞较哺乳类动物的细胞大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。 1．雌雄鉴别 通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的l～3趾基部有被称为婚垫的黑疣。 2．捉拿及处死方法： 常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1．捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。 2．处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 3．给药方法： 小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀