免疫组化_讲座2013.pptVIP

免疫组化Immunohistochemistry;免疫组化;;样品制备;预处理;原理： 甲醛的聚合作用，造成细胞内的蛋白质分子键相互交联 固定液的作用，使氨基酸残基在分子内或分子间形成醛键 细胞内抗原决定簇被掩盖，抗原不能与抗体充分反应 作用： 掩盖的抗原决定簇或变性的抗原重新暴露 抗原性得到一定程度的恢复 提高免疫组化染色的阳性率;直接法;间接法;; ABC法 (Avidin Biotin-peroxidase Complex) 一抗 生物素标记的二抗 Avidin-Biotin-HRP Complex （亲和素-HRP标记的生物素） ;抗体孵育;免疫组化在肿瘤诊断中的应用;肿瘤抗原;肿瘤抗原＆肿瘤标志物;;免疫组化在肿瘤诊断中的应用;（一）上皮性肿瘤标记 1．角蛋白（Keratin）：一种中间丝蛋白，分: （1）表皮角蛋白（Epidermal keratin，EK）——鳞状上皮或高分化鳞癌标记； （2）细胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，对腺癌、移行细胞部及低分化鳞癌标记。一般用广谱型角蛋白抗体为好，常用。 ;2．上皮膜抗原（Epithelial membrane antigen，EMA）：这亦是常用的上皮细 胞标记抗体，细胞膜阳性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定为好。其在低分化和未分化上皮中表达好，但亦可在间变性大细胞淋巴瘤、恶性横纹肌样瘤中表达。 3．桥粒蛋白（Desmoplakin）：主要标记上皮桥粒，DesmoⅡ仅表达于复层上皮。 ;4．癌胚抗原（Carcinoembrgonic antigen，CEA）：是从结肠癌中分离而得一种球蛋白，定位于细胞膜上，对肠、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌标记阳性，但个别非上皮肿瘤也可阳性。 5．甲胎蛋白（Alpha Fetoprotein，AFP）：由胎肝细胞提取的一种酸性糖蛋白，细胞浆和膜上表达，它对肝细胞癌、卵黄囊癌的特异性标记。 ;;临 床 意 义;CEA 的 优 势;CEA的局限性;预后的评估;伴CEA升高的良性疾病;（二）间叶源性肿瘤免疫组化标记 间叶组织包括纤维结缔组织、脂肪、肌肉、血管、骨、软骨及外周神经等，间叶组织肿瘤往往由多向分化的原始间叶细胞产生，存在共性，标记抗体特异性不足，有交叉反应。 1．波纹蛋白（Vimentin，Vim）：是一种细胞中间丝蛋白抗体，在多数软组织肿瘤均可表达，但纤维细胞较明显，在一些上皮性肿瘤也有阳性反应。常用作间叶源与上皮源肿瘤的第一线鉴别抗体 。;2．结蛋白（Desmin，Des）： 平滑肌、横纹肌均可阳性。 3．肌动蛋白（Actin）：平滑肌、血管 内皮、肌上皮细胞标记，HHF35特异。 4．肌球蛋白（Myotlobin），肌红蛋白 （myosin）：对横纹肌标记较好。 5．第因子Ⅷ，CD34：对血管内皮细胞肿瘤标记 较特异。 ;6．S-100蛋白：是一种周围神经 雪旺氏细胞特异标记抗体，后发现 对脂细胞、朗格罕氏细胞、肌上皮 细胞、黑色素细胞及其肿瘤均可阳性。 7．酸性或碱性磷酸酶：对骨与软骨肿瘤 标记好。 ;（三）双向分化肿瘤标记 即有上皮与间叶两种细胞分化的肿瘤的标记，如滑膜肉瘤、间皮肉瘤、脑膜瘤、癌肉瘤、上皮样肉瘤等，一般采用CK、EMA标记上皮，Vim等标记间叶细胞。 另外有一种恶性纤维组织细胞瘤，由纤维细胞、肌纤维母细胞和组织细胞混合组成的恶性肿瘤，故应用Vim和组织细胞标记来诊断。 ;（四）神经细胞、胶质细胞及神经内分泌肿瘤标记 1．神经原特异性烯醇化酶（Neuron Specific Enolase，NSE）：神经原肿瘤标记。 2．胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillaly Acidic protein，GFAP）：脑胶质细胞特异性标记抗体。CD34+F8血管 ; 3．神经内分泌肿瘤标记：包括类癌、胰岛、垂体瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞癌、原始神经外胚层瘤（PNET）等，目前应用NSE、嗜铬蛋白颗粒A（CgA）及触突素（Syn）三种抗体同时或两种一起用，因NSE不够特异。 ;（五）淋巴网状组织肿瘤（淋巴瘤）标记 1．B细胞标记抗体：CD20（L26），Ig重链（IgG、M、A、E）、轻链（λ、κ）、CD79a。 2．T细胞标记抗体：CD45RO（UCHL-1），CD3较好。CD56 3．组织细胞标记抗体：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1 Antichymotrypsin）等。;4．霍奇金淋巴瘤（Hodgk