免疫学技术及其应用.pptVIP

T细胞鉴定及功能测定 使用酶、免疫荧光标记单抗进行鉴定 淋巴细胞转化试验 E花环形成试验 混合淋巴细胞培养 CTL介导的细胞毒试验 B细胞的鉴定及功能测定 检测B细胞分化抗原 测定B细胞产生抗体的能力 溶血空斑试验 ELISPOT 介绍抗原（包括抗原肽）、抗体（单抗、多抗、基因工程抗体）、补体、细胞因子及其受体、HLA、TLR 等的背景知识，相关研究技术的原理和方法。 免疫分子相关实验技术 细胞因子的检测 生物活性检测 细胞增生或增生抑制法 细胞病变抑制法 趋化作用测定法 免疫学检测法 分子生物学技术 包括荧光、酶、放射、磁珠标记技术、和发光免疫分析技术原理、具体方法和应用。 免疫学相关标记技术 免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应 荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定 敏感性、特异性、精确性及应用范围 免疫标记技术 免疫酶测定法 免疫荧光技术 放射免疫测定法 免疫胶体金技术 免疫酶测定法 是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。 将抗原—抗体反应的高度特异性与酶对底物的高效催化作用有效地结合起来，通过酶分解底物产生有色物质(也可作用于荧光底物，产生荧光)，肉眼观察颜色深浅或酶标仪测定光密度值(OD)，以反映抗原或抗体的含量。 本法灵敏度高，检测可溶性抗原或抗体、组织或细胞表面特异性抗原。 ELISA 双抗体夹心法(sandwich assay) 检测血清、脑脊液、胸、腹水等各种液相中的可溶性抗原 间接法 测定细胞及组织表面抗原 中国疾病预防控制 2004-07-19,21:06:13 测量波长：450 参考波长： 620 0.080 0.032 0.022 0.019 0.020 0.019 0.021 0.018 0.019 0.018 0.018 0.019 0.044 0.024 0.019 0.022 0.023 0.019 0.019 0.019 0.018 0.019 0.019 0.021 0.068 0.032 0.019 0.019 0.017 0.018 0.018 0.017 0.023 0.019 0.020 0.018 0.092 0.029 0.022 0.014 0.014 0.023 0.020 0.016 0.014 0.018 0.019 0.019 0.088 0.035 0.025 0.021 0.017 0.018 0.019 0.019 0.020 0.019 0.019 0.023 0.075 0.027 0.020 0.015 0.018 0.018 0.020 0.019 0.019 0.020 0.017 0.021 0.059 0.027 0.021 0.018 0.020 0.019 0.020 0.020 0.019 0.020 0.020 0.021 1.610 0.083 0.042 0.019 0.020 0.020 0.023 0.024 0.022 0.023 0.021 0.021 酶联免疫斑点试验(enzyme—linked immunospot assay，ELISPOT) 用已知细胞因子的抗体包被固相载体，加入待检效应细胞，温育一定时间后洗去细胞，如待检效应细胞产生相应细胞因子，则与已包被的抗体结合，再加入酶标记抗该细胞因子抗体，加底物显色。 一般选择硝酸纤维素膜(NC)或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜覆盖微量反应板作为固相，在分泌相应细胞因子的细胞所在局部呈现有色斑点，一个斑点表示一个分泌相应细胞因子的细胞，通过计数可推算出分泌某种细胞因子细胞的频率。 免疫荧光技术 用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(nuorescein isothiocyanate，FITC)、藻红蛋白(phycoerythrin，PE)等。在激发光的作用下，可直接发射荧光，前者发黄绿色荧光，后者发红色荧光。 Immunofluorescent stain of immunoglobulin G (IgG) showing linear pattern in Goodpastures syndrome 天疱疮免疫荧光染色 放射免疫测定法 用放射性同位素标记抗原或抗体进行的免疫测定。 既有同位素的敏感性又有抗原抗体结合的特异性，同时具有重复性好、准确性高、标本用量少等优点。 广泛应用于激素、药物等微量物质的检测。 免疫胶体金技术 氯金酸(HAuCl+)在还原剂作用下，产生分散状态的胶体金颗粒。碱性条件下，金颗粒表面带负电荷，与蛋白质