ssh法分离早期发育相关基因片段3.pdfVIP

中国生物工程杂志 　China Biotechnology , 2005 , 25 (3) :35～39 SSH 法分离早期发育相关基因片段 1 2 2 2 郁卫东 　梁蓉 　杨丽君 　郭静竹 ( 1 北京大学人民医院中心实验室 　北京 　100044 　　2 北京大学人民医院儿科 　北京 　100044) ( ) ( ) 摘要 　目的:分离和鉴定与小鼠合子基因组激活 ZGA 以及母源调控向胚胎调控 MZT 过渡事件 相关的基因片段 ,为进一步认识 ZGA 和 MZT 发生的分子机制奠定基础 。方法 :利用单个植入前 ( ) 胚胎抑制性消减杂交 SPESSH 的方法 ,对单个小鼠M Ⅱ卵母细胞和 2细胞期胚胎进行双向消减 杂交 ;利用 cDNA array 对获得的基因片段作进一步的鉴定 。结果 :从构建的消减杂交库中随机挑 取得 31 个克隆 ,经 cDNA array 鉴定发现其中有 5 个 M Ⅱ期特异表达的基因片段和 9 个 2细胞期 特异表达的基因片段 , Genbank 检索发现其中 10 个片段是首次报道在植入前发育阶段表达 。结 论 :这些基因片段具有明显的期特异性表达的特点 ,可能在 ZGA 、MZT 和胚胎植入前发育过程中 起着重要的作用 。 关键词 　合子基因组激活 　母源向胚胎调控的过渡 　早期胚胎发育 　单胚胎抑制性消减杂交 　　哺乳动物的胚胎发育始于受精时雌雄配子的 能性的活化 ,其次依赖于母源因子的蛋白质合成发 融合 ,此时的配子在转录上处于缄默状态 。早期的 生量和质的显著改变[ 10 ] 。那么 ,此时胚胎的发育 胚胎发育由卵母细胞中母源遗传因子所控制 。母 完全依赖于自身合子基因组的激活 。 ( 为了分离母源和合子特异性的发育相关基因 , 源调 控 向合 子 型 调 控 的过 渡 maternalzygotic ) ( transition , MZT 发生在受精后头几天的卵裂期间 , 我们利用单个植入前胚胎的削减杂交技术 single 此时贮存转录本已经逐渐耗竭 ,取而代之的是新转 preimplantation embryo suppression subtractive ( ) 录本的合成 , 即合子基因组的激活 zygote genome hybridization , SPESSH 构建了MII 卵母细胞和 2细 activation , ZGA) 产物[ 1] 。 胞胚胎的削减杂交文库[ 11] 。对一些特异性表达片 母源因子对胚胎早期发育的调控具有严格的 段的随机分析表明它们可能在 ZGA ,MZT 和早期发 时间特异性 ,这样有利于精子和卵子染色质结构的 育过程中起着重要的作用 ,对这些基因深入细致的 活化 ,从而能够使转录因子更方便地接近转录位 功能分析更有助于阐明哺乳动物胚胎早期发育的 点[2 ] 。在 1的细胞期末 , 核 内转录因子的浓度升 分子机制 。 高[3 ] ,细胞核首先获得进行基础转录