ELISA双抗体夹心法检测幼犬轮状病毒的研究.pdfVIP

． ． 37—． 中国动物检疫 2008年第25卷第 1期 ELISA双抗体夹心法检测幼犬轮状病毒的研究 魏锁成 何 丽 (西北民族大学动物医学研究所 甘肃 兰州 730030) 摘 要：应用ELISA双抗体夹心法对幼犬轮状病毒感染情况进行调查．结果表明兰州地区幼犬轮状病毒感染阳 性率为57．1％，其中2～4月龄的幼犬占阳性病例的75，O％，而2月龄以内及大于4月龄的犬感染轮状病毒的病例较 少。 关键词：轮状病毒；ELISA双抗体夹心法；幼犬；兰州地区 犬轮状病毒病是由犬轮状病毒 OD 值 (N)≥2．1者为阳性；2．1者 毒感染以2～4月龄幼犬检测的阳性 (Canine rotavirus．CRV)引起的犬的 为阴性；(若N0．05，按0．05计算)： 率较高，约为42．9％：而2月龄以内及4 一 种急性胃肠道传染病．多发于幼犬． 实验有效性：阳性对照OD 值 月龄以外的幼犬则阳性率较低．约为 发病率高．临床上以腹泻为特征 本病 (P)0．5．则实验成立。 14．3％ 这可能是因为2月龄以内的幼 多发于秋冬季．尤其是晚冬至早春的 2 结果 犬体内存在母源抗体的保护而不易感 寒冷季节 由于尚无有效的犬轮状病 2．1 标准对照抗原检测：本次实验 染发病．而大于4月龄的犬则自身可 毒疫苗．且此类疾病因抗生素、磺胺类 共做标准阳性对照和标准阴性对照 能已对该病毒感染具有一定的抵抗 等抗生素对其无效．又因不同疾病引 各2份次．空白对照 1份次．反应后 力．因此感染率亦较低 2~4月龄的幼 起的腹泻在临床表现特征、疾病流行 测定OD伽值，阳性对照OD伽分别为 犬．由于体内母源抗体逐渐减少．而自 方式上均十分相似．使此类疾病的临 2．365、2．529，平均值为2．4470．5．阴 身的抗轮状病毒抗体尚未产生或产生 床鉴别诊断十分困难 本实验采用 性对照OD 值分别为0．044、0．043． 很少．不足以产生有效的保护力．再加 ELISA双抗体夹心法．对兰州地区采 平均值为0．044：空白对照OD 值为 上外界各种因素的影响(如温度、环境 集的犬腹泻样品进行检测．以此来了 0．0HD0．对照系统正常．试验成立。 卫生状况、饮食等)，使得此阶段幼犬 解兰州地区犬类轮状病毒的感染情 2．2 样品抗原测定：共检测腹泻犬 的抵抗力下降．因而临床上的感染发 况．从而对本病的诊治提供依据。 类粪样35份．检测出样品阳性为20 病率高于其他阶段犬类 l 材料与方法 份．阳性率约为57．1％：对检 阳性样 3．2 轮状病毒可感染各种幼龄动物． 1．1 样品来源：兰州地区门诊腹泻 品进行重复实验．结果相同 具体数 如犊牛、羊、兔、驹等而引起发病．且 犬粪样35份．均为临床所见腹泻病 据结果如下表所示 能交叉感染．只要该病毒在一种动物 犬．病程 1 d～3 d．年龄1日～12月之 3 分析与讨论 中存在．就可能造成本病在自然界中 间．其中母犬13只．公犬22只。 3．1 检测结果表明．幼犬的轮状病毒 长期存并传播．这也是本病普遍存在 1．2 检测试剂盒：为轮状病毒酶标诊 感染在兰州市部分地区已普遍存在． 的重要因素 由于轮状病毒对外界环 断试剂盒 (兰州生物制品研究所生 通过对本次采样病犬年龄和检测阳 境具有较强的抵抗力，对温度、pH、多 产)．内含48孔包被反应板、酶结合 性结果进行统计可以发现．犬轮状病 种化学试剂、消毒剂等都有抵抗力． 物、阳性对照、阴性对照、酶标洗液、 表1 不同年龄段幼犬RV检测结果 终止液等 1．3 粪样的稀释：对于过干粪样，用 适量生理盐水(约1：10)稀释。 1．4 洗液的配制：取20 ml酶标洗液 (浓缩液)．加入到180ml蒸馏水中， 按1：10倍稀释 1．5 器皿的准备：检测过程中所应用 编号 阳性对照 阴性对照 空白 1 2 3 4 5 到的量筒、烧杯等器皿．均经高压蒸 汽灭菌器15磅20 min灭菌 1．6 实验程序：按轮状病毒酶标诊断 试剂盒使用说明书