第二章-种子的扩大培养.pptxVIP

种子制备的过程 影响种子质量的因素 种子制备的放大原理与技术; 将冷冻干燥管、砂土管中处于休眠状态的工业菌种接入试管斜面活化后，再经摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程。这些纯培养物都称为种子。 ;种子扩大培养的任务 工业生产规模的增大 需要种子就增多 种子要进行扩大培养 种子扩大培养的任务：提供发酵产量高、性能稳定、接种数量足够的、纯的培养物。;种子扩大培养流程图;孢子制备 种子制备;孢子制备 ;放线菌孢子的制备 ;放线菌发酵生产的工艺过程;霉菌孢子的制备 ;细菌孢子的制备;种子制备;摇瓶种子制备;举例： ◆产链霉素的灰色链霉菌（S. griseus）、产卡那霉素的卡那链霉菌（S. Kanamuceticus）可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。其过程如下： 试管→三角瓶→摇床→种子罐 ;种子罐种子制备 ;种子罐培养： 获得足够的菌种数量； 种子罐的培养基接近发酵罐培养的醪液成分和培养条件，使菌体适应发酵环境。 ;种子罐级数的确定 ;确定方法;举例： 细菌：生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 茄子瓶→种子罐→发酵罐 霉菌：生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27℃,40小时孢子发芽，产生菌丝 ）→二级种子罐（27℃，10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌：生长更慢，采用四级发酵 酵母：比细菌慢，比霉菌，放线菌快，通常用一级种子 ;二、影响种子培养的条件 ;2、培养条件 （1） 温度 ●如：土霉素生产菌种在高于37?C培养时，孢子接入发酵罐后出现糖代谢变慢，氨基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。 （2） 湿度 ●如：土霉素生产菌种龟裂链霉菌，孢子制备时在北方气候干燥地区孢子斜面长得较快，在含有少量水分的试管斜面培养基下部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅速蒸发呈干疤状，孢子稀少。主要由于试管下部冷凝水多而不利于孢子的形成。一般相对湿度在40%~45%时孢子数量最多，且孢子颜色均匀，质量较好。 （3） 培养时间： ●一般来说，衰老的孢子不如年轻的孢子，因为衰老的孢子已在逐步进入发芽阶段，核物质趋于分化状态。过于衰老的孢子会导致生产能力的下降。 ;（5）pH ● pH影响菌体的生长和代谢 ;3、接种量和种龄的影响;种龄是指种子罐中培养的菌体从接种开始到移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。;4、种子罐的级数： 5、染菌的控制：;三、种子制备的放大原理与技术;梭状芽孢杆菌发酵丁醇－丙酮时种子扩大培养的程序 ;举 例： ;2、一级种子培养 一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。 (1)培养基组成 葡萄糖 2.5%，尿素 0.5%，硫酸镁 0.04%，磷酸氢二钾 0.1%，玉米浆 2.5~3.5%(按质增减)，硫酸亚铁、硫酸锰各2ppm，pH7.0。 (2)培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mI，灭菌后置于冲程7.6cm、频率96次/min的往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃。 (3)一级种子质量要求 种龄：12h，pH值：6.4±0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查：(-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。;3、二级种子培养 为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在???级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。 (1)培养基组成;(2)培养条件 接种量：0.8~1.0％ 培养温度：32~34℃ 培养时间：7~8h 通风量： 50L种子罐1:0.5 搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3 搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25 搅拌转速230r／ min;酵母发酵时的种子扩大培养;1、实验室扩大培养;;面包酵母时的种子扩大培养的程序 ;丝状真菌发酵的种子扩大培养 ;;(2)利用菌丝体作为接种物 ;放线菌发酵时的种子扩大培养