川楝素半抗原设计及其抗体制备-中国农业科学.pdf

中国农业科学 2008,41(8):2332-2338 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.016 川楝素半抗原设计及其抗体制备 1 1 3 3 1，2 1，2 3 1，2 罗 利 ，张 静 ，刘 媛 ，余向阳 ，马志卿 ，冯俊涛 ，刘贤进 ，张 兴 1 2 3 （西北农林科技大学无公害农药研究服务中心，陕西杨凌 712100 ； 陕西省生物农药工程技术研究中心，陕西杨凌 712100 ； 江苏省农业科学院食 品质量安全与检测研究中心，南京 210014 ） 摘要：【目的】获得抗川楝素的高灵敏度，高特异性多克隆抗体，建立川楝素的间接竞争酶免疫测定（IC-ELISA） 方法。【方法】采用酯化反应合成川楝素的半抗原并经HRMS，NMR及IR鉴定；用混合酸酐法和活化酯法分别合成 人工免疫抗原与包被抗原；通过免疫动物获得多克隆抗体。【结果】合成了琥珀酸单酰川楝素（TS）和戊二酸单 酰川楝素（TG）2种半抗原，与载体蛋白BSA 和OVA分别偶联制备了2种免疫原TS-BSA 和TG-BSA，及 2种包被原 TS-OVA 和 TG-OVA。免疫后获得的 2 种抗体效价达 6.4×104 5 和 3.2×10 。经 4 种不同包被原－抗体组合优化，以 （TS-Ab，TG-OVA）组合建立的川楝素 IC-ELISA 检测方法，线性检测范围为 0.01～100 µg·ml-1 ，检测限达 0.03 µg·ml-1 -1 -1 ，抑制中浓度为1.52 µg·ml ；以（TG-Ab，TG-OVA）组合建立的方法，线性检测范围为0.1～100 µg·ml ， 检测限达 0.11 µg·ml-1 -1 ，抑制中浓度为 3.49 µg·ml 。水样中基于（TS-Ab，TG-OVA）组合的川楝素平均回收率为 82.4%～106.0%，精密度为1.1%～14.3%。【结论】通过川楝素半抗原的合理设计，获得了高效价的抗川楝素多克 隆抗体，建立了快速有效的川楝素IC-ELISA检测方法。 关键词：川楝素；半抗原；多克隆抗体；ELISA Haptens Design and Production of Antibodies Against Toosendanin 1 1 3 3 1,2 1,2 LUO Li , ZHANG Jing , LIU Yuan , YU Xiang-yang , MA Zhi-qing