DXS8378基因座等位基因分型标准物的制备及其.docVIP

　　DXS8378基因座等位基因分型标准物的制备及其 【摘要】 目的 采用分子克隆技术制备X染色体DXS8378位点等位基因分型标准物，了解该STR位点在中国云南傈僳、普米、德昂三个群体的遗传多态性及其法医学应用价值。方法 用PCR扩增和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分离各等位基因片段，回收纯化后进行二次扩增，分别插入到pGEMT Easy质粒载体中，DNA测序证实插入片段的大小和结构，等位基因片段按国际标准进行命名后，经转化、扩大培养、扩增及再鉴定后制备出该位点的等位基因分型标准物，进行群体遗传学研究。结果 得到DXS8378位点分型标准物，应用此分型标准物研究中国云南傈僳、普米、德昂族人群中基因型分布频率。结论 该法制备的STR位点等位基因分型标准物适用于法医学鉴定实践,具有较高的应用价值，适合于群体遗传学的分析。 【关键词】 分型标准物 短串联重复序列 重组质粒 遗传多态性 DXS8378 　　ABSTRACT: Objective To investigate the geic polymorphism of DXS8378 STR locus of chromosome X in Chinese Lisu, Pumi and Deang populations in Yunnan and construct relative standard allelic ladders. Methods After being amplified by PCR, different STR allelic fragments the PAG electrophoresis. The STR allelic fragments plified by PCR to obtain purified allelic fragments. Next, the purified allelic fragments id vectors, and the size and structure of the inserts ed by the analysis of their DNA sequences. Then ids DNA plate for reamplification to generate the standard ladders. Results The standard allelic ladder for DXS8378 locus orphisms of DXS8378 locus in three Chinese populations in Yunnan ade by this method is excellent, and DXS8378 is po repeat; rebined plasmid; geic polymorphism; DXS8378 　　人类X染色体由于其独特的遗传方式[1]，在X染色体连锁遗传病的基因定位、遗传病的基因诊断和法医学的性别鉴定等多方面具有重要的价值。两个多态信息含量(polymorphism information content, PIC)相当的STR位点作比较时，X染色体上的STR位点的平均排除率(mean exclusion chance, MEC)比常染色体上的位点要高的多。因此，在姐妹认定和女性的父权鉴定等法医学领域中，X染色体特异性的STR有重要的应用价值[24]。 　　用PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析STR基因座时，分型是依据谱带的位置，而采用分子克隆技术制备大量优质的等位基因分型标准物，既可以提高分型的准确性，又可以增加实验结果间的可比性。目前，分型标准物主要依靠国外几家试剂大公司提供，其价格昂贵，对于新发现的STR位点，其分型标准物在市场上也无法购得。同时，一些在中国群体中识别机率和非父排除概率高的STR位点的分型标准物不能提供[56]。为此，我们应用分子克隆技术，在国内外首先制备出DXS8378位点的STR分型标准物。应用自制的分型标准物，首次调查了中国云南地区傈僳、普米[7]、德昂族群体中的DXS8378基因型分布频率，对其在法医学中的应用价值进行评价，对实现以此技术为基础的STR分型标准物的标准化、国产化进行了探索[8]。 　　1 材料与方法 　　1.1 样本与引物 遵循知情同意原则,随机抽取中国云南地区93名普米族(其中女性37名)、95名傈僳族(其中女性38名)和83名德昂族(其中女性38名)群体中无亲缘关系个体的静脉血,EDTA抗凝，-20℃保存。引物序列查自GenBank，分别为F：CAC AGG AGG TTT GAC CTG TT；R：AAC TGA GAT GGT GCC ACT GA，由奥科公司合成。 　　1.2