PDTC逆转K562-AO2细胞多药耐药性机制研.docVIP

　　PDTC逆转K562/AO2细胞多药耐药性机制研 【摘要】 目的 研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法 采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米(Ver)预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化，采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1 mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果 ①K562/AO2细胞对阿霉素(ADM)的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后，ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低，相对逆转耐药效率为93.03%，强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%(Plt;0.01);②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞(Plt;0.01);PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达，伴随mdr-1 mRNA表达减少，呈时间依赖性。结论 抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO2细胞耐药性，其机制与mdr-1 mRNA转录表达减少有关。 【关键词】 吡咯烷二硫代氨基甲酸盐;核因子κB;K562/AO2细胞;多药耐药;mdr-1基因 　　Abstract: Objective To investigate the effect of pyrrolidine dithioearbama (PDTC), an inhibitor of nuclear factor κB (NF-κB) activity on reversing the chemoresistance of K562/AO2 cells and its mechanism. Methods Human erythroleukemic cell line K562 and its adriamycin-resistant counterpart K562/AO2 cells ployed to detect the multiple drug resistance of K562/AO2 cells, the effect of PDTC on cell proliferation and the variations in drug sensitivity of K562/AO2 cells pretreated il (Ver) in noncytotoxic dose. Immunocytohistochemical method and RT-PCR dr-1 mRNA in K562 and K562/AO2 cells, respectively, and the effect of PDTC treatment at different time points. Results ①The drug resistance of K562/AO2 cells to ADM es as much as that of K562 cells. DR)于1970年由Biedler和Riehm[1]首次报道，是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制不同的多种抗肿瘤药物交叉耐药。MDR是化疗失败和肿瘤复发的主要原因，成为当前肿瘤药物治疗中亟待解决的问题。多药耐药机制复杂，以mdr-1/P-gp研究最为广泛和深入[2-3]。我们前期的研究发现，抑制核因子κB(NF-κB)的异常活化可以诱导肿瘤细胞凋亡[4]，本实验进一步研究NF-κB对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA表达的影响。 　　1 材料和方法 　　1.1 主要试剂 RPMI 1640培养基购自GIBCO公司，胎牛血清购自杭州四季青生物公司，PDTC、MTT购自Sigma公司，阿霉素(ADM)购自浙江海正药业公司，维拉帕米(Ver)购自上海禾丰制药公司，NF-κB鼠抗人单克隆抗体购自Santa Crus公司，二步法免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，细胞总RNA提取试剂盒、RT-PCR第一链cDNA合成试剂盒、PCR试剂盒、DNA Marker购自天为时代科技有限公司。 　　1.2 细胞株及培养 人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562、人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞ADM耐药株K562/AO2均购自中科院血研所。实验前两株细胞均培养于含10%胎牛血清，青、链霉素各100×103 U/L的RPMI 1640培养基中，置37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中。K562/AO2细胞在培养过程中加ADM 1 mg/L以维持耐药性，实验前2周停药。