无菌间优势微生物的分离鉴定及其对一般消毒剂的抗性研究.pdfVIP

无菌间优势微生物的分离鉴定及其对一般消毒剂的 抗性研究 摘 要 对于药品和食品生产行业而言，无菌操作室是非常重要的基础设施之一。监 控无菌室内微生物分椎和室内优势菌株的分离鉴定是标准生产习惯的一部分。常 用的监控方案主要是媒介的使用，例如SCD琼脂法在300c温度下培养4天。依 照欧洲联合会的标准生产要求，可允许的表面接触平板的CPU数量级别从A到 100-1000从3到5级。为达到这个要求，无菌室所有的可接触表面包括地板、空 气等以及在操作人员的手部皮肤都要经过多种消毒剂进行常规消毒。在许多药品 类相关生产制造行业，紫外线照射、苯酚溶液擦洗(苯酚又称来苏儿，Lys01) 是三种比较常见的用于无菌室空气、器械和人手皮肤的消毒方法． 对于科研和医药食品生产而言，要保持无菌操作车间的真实洁净无异于一场 战斗，对保证产品质量极为重要。要决定用哪种消毒方法最合适，或者哪几种方 法的结合更合适于某个无菌生产操作室，我们就有必要掌握这些优势菌株的最初 污染源和污染菌株。因此必须先弄清楚该无菌室的微生物分布以及这些微生物所 具有的各自的特点，以及对各种消毒剂的抗性极限等。 本研究的目的就是分离和鉴定分布于某药品类无菌生产车间的微生物菌株 及其抗性特性的测定。在鉴定可能存在于无菌车间的微生物污染源的研究中，对 分离的菌株进行菌落和细胞形态学比较，并且做常规生理生化测定，同时对这些 S 分离得到的优势菌株进行16rDNA基因扩增和部分保守序列鉴定。 rDNA序列 生理生化试验表明有3株分离菌株在很多方面都有相似性，16S rDNA 分析表示3株菌具有高于99％的相似性，部分16SBlast分析更加确定了 这3株菌都属于葡萄球菌属，结合生理生化测定结果可以初步得出结论：其中2 株分别最相似于s oleivoran。 分离菌株的特有抗性测定过程中，一共测试了对3种消毒剂的抗性作用(UV、 苯酚、和CHG)。以金黄色葡萄球菌作对照，在实验结果的基础上分析分离菌株 对三种消毒剂的敏感度大小，即抗性能力，从而判定分离菌株是否属于抗性基因 获得型突变株。结果表明：虽然分离菌株的抗消毒剂能力较强而得以存活于无菌 室中，但是经过试验，与对照菌株金黄色葡萄球菌sa进行的抗消毒剂能力的作 用时『白J和浓度的双因素差异分析，并无显著差异，这也就表明分离菌株只是普通 的现存野生株，而不是因为含有某种质粒或者遗传获得产生的突变株。 16S 关键词：无菌室，优势菌株， rDNA，系统进化树，消毒剂，抗性能力 Characterizationof isolatesfromclean bacteria predominant roomsina unitand pharmaceuticalproduction oftheir todisinfectant analysis sensitivity Abstract Cleanroomsareessentialin orfood asepticpharmaceuticalproduction． and the microbialdistribution