六味地黄汤对雌性致衰模型小鼠生殖器官影响的实验研.docVIP

　　六味地黄汤对雌性致衰模型小鼠生殖器官影响的实验研 【摘要】 目的观察六味地黄汤（LethodsTo establish senility model through subcutaneous injection of D-galactogen into the neck and back of mice, orphology. ResultsLiuprove the content of β-endorphin, increase the cornified and epithelial cell and epidermal cell in the vaginal exfoliated cell smear of mice. ConclusionLiue function as estrogen, al functioning of ovaria by regulating the us-hypophysis-ovarian axis. 　　Key ature ovarian failure, POF)是指卵巢功能提前衰退，表现为妇女40岁之前非生理性的月经停止，伴有潮热、原发及继发不孕、全身和生殖器萎缩，卵泡刺激素(follicular stimulating homone,FSH)升高(FSHgt;40IU/L)及E2下降。目前病理机制不甚清楚，而建立POF动物模型对其病因的基础研究以及指导临床的诊断和治疗有重要意义。由于半乳糖血症患者常表现为原发性闭经或卵巢早衰，且有报道动物体内的半乳糖增多可引起类似与卵巢早衰的改变，故本课题组采用D -半乳糖建立小鼠卵巢早衰动物模型［1］，通过观察LPUSCX31显微镜；德国原装进口mICROMGMBH Hm200切片机；CSˉ摊片机。电子体温计，DT一ITB型;电子天平，JD2000 - 2 ;Y～计数器，GAMMA -C120。 　　2 方法 　　2.1 衰老动物模型的建立 　　采用D-半乳糖亚急性衰老模型建立法。D -半乳糖按每只小鼠经背部皮下注射D - 半乳糖0.3 ml/（kg·d），注射42 d。 　　2.2 实验分组 　　 　　将60只小鼠随机分成正常对照组（A）、衰老模型组(B)、六味地黄汤治疗1组(C)，六味地黄汤治疗2组(D)，乙烯雌酚组(E)，每组12只。A组、B组各鼠每天灌胃生理盐水20 g·kg-1，同时B组，C组，D组，E组各鼠每天经背部皮下注射D-半乳糖0.3 ml·kg-1，连续给药42 d。从11天开始，C组，D组分别灌服六味地黄汤（原汁1 g/ml浓度）20 g·kg-1·d-1或40 g·kg-1·d-1，E组乙烯雌酚0.7 mg·kg-1·d-1灌胃，连续给药32 d。 　　2.3 观察指标及方法 　　2.3.1 动情周期的测定给药两周，逐只连续观察受试动物外阴部、阴道上皮脱落细胞动情周期变化。用消毒棉签插入小鼠阴道约0.5 cm，轻轻转动后取出，将棉签上的阴道脱落细胞均匀涂于洁净的载玻片上，待涂片自然风干后用碱性美蓝溶液染色5 min，然后用蒸馏水冲洗，自然风干后镜检，观察细胞形态，确定动情周期。每日下午定时阴道涂片、H-E染色，细胞学检查。 　　2.3.2 P，E2，β-内啡肽检测各组连续灌胃治疗2周后，称量体重并在大鼠动情间期，按放射免疫药盒操作说明测定β-内啡肽及雌、孕激素的含量。每只鼠取血清200 μl，血清量不足的动物将血清合并后检测。成批检测P，E2,β-内啡肽，留样时要求用1%肝素和抑肽酶抗凝，迅速低温4℃离心，取血浆低温－20℃保存待测。 　　2.3.3 生殖器官体质量观察42 d采血后断头法处死动物，摘取子宫、卵巢，剔除脂肪和其他组织，滤纸稍拭后，分别放入电子分析天平精确称出湿重。 　　2.3.4 形态学观察分组编号并浸入10％福尔马林固定、包埋、切片、HE染色、封片，进行组织学观察 。 　　2.3.5 统计学处理:用SPSS13.0进行统计处理,统计学方法为样本均数的T检验。 　　3 结果 　　3.1 小鼠阴道脱落细胞涂片的影响小鼠性周期一般为5 d。灌胃2周检测,除了E组有不同程度延长(5～6 d)外，其余各组周期均不相同。表现为B组与C组周期紊乱，长短不一。 D组与A组周期基本稳定为4～5 d。在灌胃4周检测,A组周期无明显改变、仍表现为4～5 d；而其余各组均有明显改变，表现为D组周期延长至6～7 d； E组延长至7～8 d；C组基本趋于正常，表现为4～5 d； B组周期仍不规则。结果显示，D,E组与A组角化上皮细胞最高值及表层细胞最高值比较差异显著(Plt;0.05)，C组与A组比较无显著差异(Pgt;0.05), C,D,E组与B组比较有显著统计学差异( Plt;0.05)。 　　考虑是雌激素水平增高的表