芦荟苷人工抗原的合成与鉴定.pdf

· 406· 药 物 分 析 杂 志 ChinJPharmAnal2016，36(3) 生物检定 芦荟苷人工抗原的合成与鉴定 施荣枫 ，刘文平 ，王雪茜 ，赵妍 ，屈会化 ，赵琰 ，王庆国 (1．北京中医药大学基础医学院，北京 100029；2．北京中医药大学科研实验中心，北京 100029) 摘要 目的：合成并鉴定芦荟苷人工抗原，为进一步生产芦荟苷单克隆抗体和研究其药理药效奠定基 础。方法：采用高碘酸钠氧化法分别制备芦荟苷免疫原(AloBSA)和包被原(Alo—OVAo用薄层色 谱法和紫外光谱法鉴定抗原的合成是否成功；用动物免疫的方法测定其抗原性，用间接ELISA方法检 测血清效价；用间接竞争ELISA法检测抗体特异性。结果：经薄层色谱法和紫外光谱法检测，芦荟苷与 BSA和OVA均成功偶联；用免疫原AIo--BSA可成功使BALB／c小鼠产生芦荟苷抗体；建立的间接 EuSA 法测得血清效价为 1：32000,建立的间接竞争ELISA法证明所得的抗体能特异性地与芦荟苷结合。 结论：高碘酸钠氧化法成功合成了芦荟苷的人工抗原，具有 良好的免疫原性，能诱发BALB／c小鼠产生针 对芦荟苷的特异性抗体，可用于制备芦荟苷单克隆抗体及建立相应免疫分析法。 关键词：芦荟素；人工抗原；免疫原性；酶联免疫吸附法；紫外光谱法；薄层色谱法；芦荟苷单克隆抗体； 免疫分析法 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2016)03—0406—05 doi：10．16155j／．0254-1793．2016．03．03 Synthesisandidentificationofartificialantigenofaloin SHIRong—feng，LIUWen—ping ，WANGXue—qian ，ZHAOYan ， QUHui—hua，ZHAOYan，WANGQing—guo (1．SchoolofPreclinicalMedicine，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029，China； 2．CenterofScientificResearchBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100029，China) Abstract Objective：Tosynthesizeandidentifythealoinartificialantigen，andthustolaythefoundationforthe furtherproductionofaloinmonoclonalantibodyandthestudiesofitspharmacologicaleffect．M ethods：Oxidation methodusingsodiumiodidewasusedtosynthesizeimmunogenicnatigen(Alo-BSA)andcoatingnatigen(Alo- OVA)．Theuhravioletspectroscopyandthinlayerchromatographywereusedtoidentifywhetherthesynthetic antigenwassuccessfu1．TheanimalimmunemethodwasUSedfordeterminingtheantigenicity，theindirect ELISAmethodwasusedtodetectserum titer，andtheindireCtcornpetitiveELISAmethodwasusedtodetectthe antibodyspecificity．Results：Thinlayerchromatographyandultravioletspectroscopydetectionshowedaloinwas 国家自然科学基金：基于病证结合的清开灵 ／精制清开灵抗缺血性中风证治特点及其对神经血管单元的多靶点调控机制研究(编号 资助 $ 通信作者 Tel：(010E—mail：wa“gqg8558