紫外可见分光光度计的使用.pptVIP

互 补 色 原 理 植物叶子呈现绿色是因为植物中存在一种吸收蓝紫光和红光的载体——叶绿素 样品名设置，备注信息及文件名输入 基线校正 用户基线校正方法：可将scan speed 设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。 将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮 系统基线校正方法。 使用空气作为参比和样品。按按钮 出对话框见图，选择System后按[OK]按钮，进行系统基线校正。 测　　量 有两种方法可以开始测量： 使用菜单方式 　选择[Spectrophotometer]菜单下Start]选项开始测量 使用按钮方式 ：按按钮 　开始测量 如果要终止扫描按按钮 　。 开始 方法设定 样品名输入 将空白样品分别放入参比池和样品池 将样品放入样品池 开始测量 开始测量 打印数据 进行用户基线校正 二 分光光度计的使用-光度法 测量参数设置 在[Edit]菜单中选择[Method…]选项。出现下列设置窗口. 具体操作程序 Method: general:　Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量） Quantitation定量参数设置页面： 　在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1st order”， “2st order”， “3st order”，也可以不校准。在concertration中键入标准浓度单位。 3. Instrument 4 standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称 5 吸光度自动校零 　在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮 　进行吸光度校零。 6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长， 7 放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成 　　　 后自动给出标准曲线。 8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此 时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。 9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。 三 注意事项 1. 开机预热15分钟左右。 2. 测定时应注意： 参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。 使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。 已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。 3. 测量条件的选择： 选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7读数范围内时,测量的准确度较高. 选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。 4. 用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。 5. 正确登记，将仪器及实验台擦干净。 思考题 分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图。 紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？ 一般采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？ 比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？ 为什么测定时使用参比池？参比溶液怎么选择？ 在进行波长扫描与光度测定时需要设置哪些参数？ * * 紫外可见分光光度计 主要内容 1、工作原理及仪器组成 2 、分光光度计的使用 　波长扫描 　定量测定 3 、注意事项 物质的颜色与吸收光的关系： 当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。 一、工作原理及仪器组成 颜色的产生 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 光谱示意 表观现象示意 复合光 利用一定频率的紫外--可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。 溶液对光的作用示意图 物质对光的选择性吸收－溶液对光的作用 I0 入射光辐射强度 I 透射光辐射强度 T 透射比 a 吸光系数 ε 摩尔吸光系数 光吸收遵循朗伯-比尔定律： 溶液对光吸收过程 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 仪器组成- 单光束分光光度计 双光束分光光度计 比值 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 光束分裂器 组成：光源、单色器、样品池、检测器 1．光源： 　　①能提供连续的辐射；②光强度