微生物学3 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察.pptVIP

一、实验目的 了解并掌握油镜的原理和使用方法； 掌握细菌革兰氏染色的原理和方法，学会在油镜下观察细胞和识别细菌的形态特征。 二、实验材料 1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌 2、仪器：显微镜 3、染色液：草酸铵结晶紫染色液、Lugol碘液、95％乙醇、复红染色液 4、材料：载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸 三、显微镜及油镜使用原理 （一）普通光学显微镜构造（p.23-27） 1.光学部分:接目镜 、 接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。 它使检视物放大,造成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。 显微镜的放大倍数和分辨率 （二）油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 （三）显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干净的擦镜纸擦去多余的二甲苯。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 （三）、实验操作 p.31，采用三区涂片法 步骤： 1、在玻片的左右端各加1滴水，用无菌接种环挑少量金黄色葡萄球菌与左边水滴充分混合成仅有金黄色葡萄球菌的区域，并将少量菌液延伸至玻片的中央。 2、用无菌的接种环挑少量大肠杆菌与右边水滴充分混合成仅有大肠杆菌的区域，并将少量大肠杆菌菌液延伸至玻片中央，与金黄色葡萄球菌混合成含有两种细菌的混合区。 3、实验报告 本实验每人做一张。 实验报告中要画图表示结果。 * * * * 实验三 油镜使用和细菌形态观察 1、显微镜油镜的使用 2、细菌形态的观察 3、革兰氏染色 图1-1-2 光学显微镜的成像原理 倒立的虚像 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=0.61λ/n·Sinα/2 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰 根据公式D=0.61λ/n·Sinα/2 ，增大分母，使得D值减小，分辨率增大。 三.显微镜油镜观察操作方法 在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。然后用细调节器调节，在目镜下找到最合适的观察点。 油镜使用毕后：上升镜筒，取下载玻片，用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。 一、实验目的 进一步熟悉使用油镜观察微生物的方法，初步认识细菌的基本形态和特殊结构特征 四、细菌形态的观察 二、观察内容 基本形态：杆菌，球菌（注意大小、染色性、排列） 特殊结构：鞭毛，芽胞，荚膜（先找到菌体，再仔细观察特殊结构） 以画图的方式完成该实验的报告 图下标示： 1、菌种：杆菌（大肠杆菌，G-） 2、放大倍数 3、观察方法 画图注意事项：1、以圆圈表示视野 2、注意菌体大小比例合适 3、标出菌体颜色，显示典型排列方式 4、特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置 五、革兰氏染色 （一）、实验目的 学习微生物涂片、革兰氏染色的基本技术 （二）、 革兰氏染色的工作原理 革兰氏染色法是细菌学中重要的鉴别染色法