原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
荧光原位杂交技术汇编
* * 荧光原位杂交技术 内容与方法 1.探针及标本的变性 （1）探针变性：将探针在75℃恒温水浴中温育5min，立即置于0℃中5～10min,使双链DNA探针变性。 （2）标本变性 1）将制备好的染色体玻片标本于50培养箱中烤片2～3h。注意Giemsa染色的标本需预先在固定液中褪色后再烤片。 2）取出标本玻片，将其浸在70℃～75℃的70%（V/V）甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2～3min。 3）立即按顺序将标本经70%（V/V)、90%（V/V）和100%（V/V）的冰乙醇系列脱水，每次5min,然后于空气中干燥。 2.杂交 将已变性或欲退火的DNA探针10μl滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37 ℃杂交过夜（15~17h)。由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程应在湿盒中进行。 3.洗脱 此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。 （1）杂交次日，将标本从37 ℃温箱中取出，用刀片轻轻将盖玻片揭掉。 （2）将已杂交的拨片标本放置于已预热至42 ℃~50 ℃的50%（V/V)的甲酰胺/2× SSC中洗涤3次，每次5min。 （3）在已预热至42 ℃~～50℃的洗脱液中洗涤3次，每次5min。 （4）在室温下，将玻片在2 × SSC中清洗一下。 4.杂交信号的放大 (1)在玻片的杂交部位加150μl封闭液Ⅰ，用保鲜膜覆盖，37℃温育20min。 (2)去掉保鲜膜，再加150μl抗生素－异硫氰酸荧光素(avidin-FITC)于标本上，用保鲜膜覆盖，37℃继续温育40min。 (3)取出标本，将其放入已预热至42℃～50℃的洗脱液中洗涤3次每次5min。 （4）?在玻片标本的杂交部位加150μl封闭液Ⅱ，覆盖保鲜膜，37℃温育20min。 （5）去掉保鲜膜，加150μl抗－抗生物素蛋白（abti-avidin）于标本上，覆盖新的保鲜膜，37℃温育40min。 （6）取出标本，将其放入已预热至42℃～50℃的新洗脱液中，洗涤3次，每次5min。 （7）重复步骤（1）、（2）、（3），再于2×SSC中室温清洗一下。 （8）取出玻片，自然干燥。 （9）取200μlPI/anti-fade染液滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。 5.封片?可采用不同类型的封片液。如果封片液中不含Mowiol(聚乙烯醇，可使封片液产生自封闭作用)，为防止盖玻片与载玻片之间的溶液挥发，可使用指甲油将盖玻片周围封闭。封好的玻片标本可以－20℃～－70℃冰箱的暗盒中保持数月之久。
文档评论（0）