高效液相色谱法使用中常见问题及解决方法.docVIP

高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法 刘萍1，侯西成2，郝满良1 （1.河北农业大学动物科技学院，河北 保定 071001；2. 河北农业大学林学院，河北 保定 071001） 摘要：介绍了高效液相色谱仪的组成，列举了使用过程中常见的技术问题和仪器故障，并对其进行分析， 提出了一些解决的办法和对策。 关键词：高效液相色谱仪；问题；解决方法 Conmon Problems and Countermeasure for Operation of HPLC struement LIU Ping1，HOU Xi-cheng2，HAO Man-liang1 (1.College of Animal Science and Technology, Agricultural University of Hebei ,Baoding 071001;2.College of Forestry Science, Agricultural University of Hebei ,Baoding 071001) Abstract:The structure of high perfoanance liquid chromatography(HPLC)was introduced in this paper.It illustrates the common promblans and trouble in HPLC analysis, and gives the respectively to exchange experience with other HPLC analysis. Kevwords : HPLC irrstrumen; problem;resolvent 高效液相色谱法(Highperfomanceliquidchromatography,HPLC)是20世纪60年代末迅速发展起来的一种新型分离技术。它以经典液相色谱为基础,采用了高压送液泵、微粒型填料和各种高灵敏度检测器。因此,具有适用范围广、分离效率高、分析速度快、流动相可选择范围宽、检测灵敏度高、色谱柱可反复使用、流出组分容易收集等优点[1]。目前,在医药卫生、食品、环保等各个领域已得到了广泛的应用。世界各国已将该法收载于药典[2-4]。 高效液相色谱仪在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。 1.高效液相色谱仪系统 高效液相色谱仪是实现液相色谱分析的仪器设备，其基本单元组成如图1所示，是由溶液贮液器、泵、进样器、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成[5]。 控制系统和数据处理系统 控制系统和数据处理系统 记录仪检测器色谱分离柱进样器泵溶液贮液器 记录仪 检测器 色谱分离柱 进样器 泵 溶液贮液器 自/手动进样器器 自/手动进样器器 图1 高效液相色谱仪器的组成 高压泵从溶液贮器中抽走流动相，流经整个仪器系统，形成密闭的液体流路。样品通过进样系统注入色谱分离柱，在柱内进行分离。柱流出液进入检测器，使已被分离的组分逐一被检测器收集，并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰，通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算，从而完成整个分析过程[6]。 2.常见问题及其解决方法 2.1柱压问题 所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在345kPa以内 (在使用梯度洗脱时,柱压平稳、缓慢的变化是允许的）[7]。压力过高、过低都属于柱压问题,缩短色谱柱的使用寿命。 表1 柱压变化的原因及解决方法 出现情况 原因 解决方法 柱压高于正常值 色谱柱被堵塞、流速设定不正确、系统压力零点飘移 更换新的色谱柱、重新设定正确流量、调节压力传感器的零点。 进样器、柱端过滤器、管路或连接口堵塞 拆下过滤器用硝酸超生清洗、更换被堵塞管路或按说明书方法进行清洗。 流动相配比不正确 重新设定配比 长期使用柱端固定相板结 挖掉板结部分修补柱端 分析生化、染料等易污染固定相的样品 方法同上，采用保护柱 柱压低于正常值 某连接处泄露 打高压300bar查找泄露处，拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜 泵里进空气 打开Purge阀，用３-５ml/min的流速冲洗 没有流动相流出 检查储液瓶中有无流动相、沉子是否浸没在流动相中、泵是否运行。 参比阀未关闭 将流速降低后关闭参比阀，一般降至0.1～0.2ml/min后关闭参比阀 2.2基线噪声和漂移 噪声和漂移是检测器稳定性的主要表现。 2.2.1基线噪声较大和对策 对于紫外检测器，氘灯光源打开后要预热３０分钟以上，基线才