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基因扫描 (Gene Scan) 基因扫描可用于检测待测物种的有无、单链构象多态性分析(SSCP)、基因突变等检测。 DNA测序分析 ABI PRISM 310遗传分析仪可用于DNA测序分析，四种双脱氧核苷酸碱基带有四种不同的荧光染料，利用双脱氧末端终止法测序。经过一根盛有变性聚丙烯酰胺凝胶的毛细管电泳，长短不同的DNA片段依次通过激光检测窗口，由CCD摄像机收集荧光信号，再由机算机测序分析软件对所收集的信号进行分析。 测序速度高达200bp/小时，一个样品一次可测定700多个碱基。 激光 CCD 摄像机 ddATP ddTTP ddGTP ddCTP DNA测序仪的应用 1、基因组测序 2、基因突变分析 3、基因连锁图谱和指纹图谱 4、基因表达 5、疾病的基因诊断 DNA测序检测 亨廷顿病(Huntington’s disease，HD) 亨廷顿病是以神经系统退行性改变为主要特征的常染色体显性遗传病。1993年发现HD基因，并揭示IT15基因的不稳定突变，即IT15基因5’端编码区CAG三个核苷酸的异常扩展性重复是HD的遗传学基础。 病例来源： 江苏徐州HD家系 ：7例患者，30例HD风险者。 浙江慈溪HD家系：1例患者，9例HD风险者 提取受检者外周血白细胞基因组DNA，先进行PCR扩增IT15基因，接着进行DNA测序反应， 检 测 结 果 IT15基因在正常人中其(CAG)的重复数呈多态性，其拷贝数在13~26之间。 HD的IT15基因的(CAG)拷贝数均大于40，大多数为45~50。 亨廷顿病发病预测 IT基因的(CAG)拷贝数的多少与亨廷顿病的发病年龄呈正相关，(CAG)拷贝数在45~50时，发病年龄为40岁左右；(CAG)拷贝数在50以上时，其发病年龄在20~30岁之间。 亨廷顿病的发病机制 亨廷顿病是由IT基因的(CAG)重复序列的重复数太多引起的，CAG可编码谷氨酰胺，由于CAG的重复数太多，则由CAG编码的谷氨酰胺在IT基因编码的蛋白质中大量积累，从而影响蛋白质的正常功能。 DNA测序在亨廷顿病中的应用 根据亨廷顿病的发病机制，可以利用DNA测序技术进行亨廷顿病的预测和诊断。可抽取羊水细胞，提取其DNA后，用PCR扩增IT基因的目地片段进行测序，检测其(CAG)拷贝数的多少，根据CAG重复数的多少预测胎儿出生后患HD的风险系数，决定是否终止妊娠。 乙型血友病的DNA测序检测 血友病可分为甲型血友病和乙型血友病 两种血友病的临床症状相似，出血部位 为肌肉、关节及深部组织，直到1952年 才用凝血活酶生成实验(TGT)及部分凝血 活酶时间(PTT)测定实验将两种血友病分 开。 Y X 正常 男性 Y X 血友病 男性 X X 正常 女性 X X 血友病 女性 X X 携带者 女性 正常基因 血友病基因 目前研究发现导致乙型血友病发生的 FⅨ基因功能障碍的基因突变种类繁多， 大约有400种左右，由于乙型血友病基因 较小，对乙型血友病可以测定基因的序 列作出诊断。 从36例乙型血友病患者中共检出17位 女性为突变基因携带者。检测出女性携带者 后，可对该妇女开展产前诊断，如果发现了 胎儿为血友病患者或血友病基因携带者，则 可终断妊娠，阻断有害基因传代蔓延，做到 优生优育。 临 床 意 义 DNA测序在临床上的意义 一、对于多基因的遗传病，可通过测定其相关基因的DNA序列后，针对不同基因的变异情况而采用不同的治疗方案，达到临床的个体化用药治疗。 二、及早发现遗传病，有利于优生优育。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * 第八章 DNA序列测定 王 文 君 广州中医药大学 分子生物学技术实验室免疫研究室 自然界中物种(生物)的丰富多样性是由其生命本质决定的，物种的本质特征的多样性首先体现在其DNA序列的多样性(病毒为RNA)，这种千差万别的DNA序列正是自然界中形态和功能各异的物种的基石。我们要了解各物种的本质特征，就必需从其DNA的一级结构上开始。因为其DNA的一级结构是各物种生理功能的基础，也是我们对其进行深入研究的出发点。 DNA是物种生存和发展的基石 一、物种的生存