乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法-中国动脉硬化杂志.PDF

90 ISSN 1007鄄3949 Chin J Arterioscler,Vol23,No 1,2015 ·方法学研究 · [文章编号]摇 1007鄄3949(2015)23鄄01鄄0090鄄04 乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法的优化 1 1 2 2 2 2 朱晓丽 ,王 丽 ,马依彤 ,杨毅宁 ,陈邦党 ,马苗苗 (1.新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科,新疆石河子市832008; 2.新疆医科大学第一附属医院心脏中心,新疆乌鲁木齐市830054) [关键词]摇 心肌细胞;摇 心肌成纤维细胞;摇 原代培养 [摘摇 要]摇 目的摇 优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。 方法摇 分别用胰酶、 域型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细 胞。 光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌成纤维细胞的基本形态特征的变化,原代心肌细胞行心肌肌钙蛋白免 疫荧光鉴定,而心肌成纤维细胞则用第2代行波形蛋白免疫荧光鉴定。 结果摇 心肌细胞在2 ~4 h 开始贴壁生长, 12~24 h贴壁速率大幅增加,并出现自发性搏动,48~72 h心肌细胞粘合成簇,细胞成活率,纯度均达95%以上;心 肌成纤维细胞第2~4代细胞生长良好,纯度高达98%以上。 结论摇 此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心 肌细胞和心肌成纤维细胞,为心血管疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型。 [中图分类号]摇 Q2鄄33 [文献标识码]摇 A Optimize the Method of Isolation and Culture Neonatal Rat Cardiomyocytes and Cardiac Fibroblasts in Vitro 1 1 2 2 2 2 ZHU Xiao鄄Li ,WANG Li ,MA Yi鄄Tong ,YANGYi鄄Ning ,CHEN Bang鄄Dang ,and MA Miao鄄Miao (1.Departmentof Cardiology,theFirstAffiliatedHospital,Schoolof Medicine,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832008, China;2.Heart Centre,The FirstAffiliatedHospital of Xinjiang Medical University,Urumqi,Xinjiang 830054,China) [KEY WORDS]摇 Cardiomyocytes;摇 Cardiac Fibroblasts;摇 Primary Cell Culture [ABSTRACT]摇 摇 Aim摇 Tooptimizetheconditionsandmethodsof SDratcardiomyocytesandcardiacfibroblastsinvitro culture.摇 摇 Method摇 Digested ventriculartissuewithtrypsinfirst,andthencollagenase域.摇 Collectedandculturedneo鄄 natal ratcardiacmyocytesandfibroblaststhroughthewayofdifferentialadhesionfortwotimes.摇 Thebasicshapechangeof cardiac myocytes and card