毛细管电色谱—质谱联用在药品工业应用的原理和.PDF

毛 细 管 电 色 谱 — 质 谱 联 用 在 药 品 工 业 应 用 的 原 理 和 前 景 毛细管电色谱（CEC ）和电喷雾（ ESI ）质谱（ MS ）联用，已成为某些典型的药品混合物分离和 定性的高分辨率的在线技术。 毛细管电色谱（CEC ）是一种使用小直径、填充的熔融硅毛细管柱的技术。它结合了非常高效的毛 细管区带电泳（CZE ）和反相液相色谱（ RPLC ）的优点，可用于中性粒子和带电粒子的分离。柱内的 流动相是由电驱动的，是毛细管壁表面硅烷基团电离的结果，表面硅烷基的电离产生了一个双电层，依 次序引导着电流向阴极移动，称作电渗（ EO ），这种电渗流呈塞式流形，不同于压力驱动的抛物线流 形。第二个优势是流动与颗粒的大小无关，可以使用非常小的颗粒而且理论上柱长不受限制。CEC 的选 择性同传统的 RPLC 对中性粒子和电泳对带电粒子的选择性相同。该技术和质谱联用具有巨大的优势， 因为更窄的色谱峰产生了更高的质量通量，并且它提供了一种用胶束电动色谱（MECC ）使用电驱动分 离中性粒子的替代方法。大量的毛细管电泳—质谱（ CE — MS ）联用应用被报道，且 Cai 和 Henion 最 近对该领域进行了综述。 Verheij 和hugener 报道了加压电色谱（PEC ）的联用，是一种结合压力驱动和电 渗驱动的色谱和质谱联用，流形接近于压力驱动系统。Gordon 报道真的CEC — MS 同连续流快速原子轰 击以及电喷雾质谱的联用，由于检测和在线识别的特殊作用，质谱带给分离技术的灵敏度在同气相 / 液 相色谱、高效液相色谱、超临界流体色谱以及毛细管区带电泳的联用中体现出来。 实 验： 毛细管柱的制备： CEC 柱是由一根熔融硅胶管，长90cm ，内径 50µm, 外径 375µm ，用3µm Hypersil ODSA 填料填充一个 25cm 的长度，填料在其他地方已详细描述过，柱子在 PH 为 9 时用乙腈 /5mM 四硼酸钠为80/20 平衡。 色谱： 毛细管柱被装于一台 Isco 型号为3850 电色谱（Isco Inc, Lincoln, NE, USA ） , 连接方式为进口填充部分插入 电极缓冲液中，出口末端同质谱连接，一根长的（约65cm ）未填充的毛细管柱通过探针进入质谱，第一 根柱子有约65cm 长的空管 , 从而可以与不含空管的柱子比较以得出扩散效应的情况。样品溶解在缓冲液 3 ） , 然后电动进样（ 30KV ， 5s-10s ），用样品溶液补充流动的缓冲液。进样时，重新 中（约 1mg/cm 加 30KV 电压，以产生 2-4µA 的电流。 质谱： 质谱在一个 VG 平台设备上操作，并安装一电喷雾接口，在此位置CEC 的毛细管柱通过一探针连接到质 谱上，这个部分包括两个同心的不锈钢毛细管，并包裹住一CEC 毛细管柱，毛细管内部有一进入质谱的 探针（见图 1 ）。这些不锈钢毛细管柱连接起来以用于分离如下图所示的环状物，补充流被一台 HP1050 HPLC 泵（ HP Let, stockport,UK ）以 0.5ml/min 流速泵入一精 确的微流处理器（LC Packings Amsterdam, The Netherland ） , 然后通