液相色谱鄄线性离子阱鄄静电场轨道阱回旋共振组合质谱法鉴定乙胺.PDF

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第1期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年1月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 32~40 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150309 液相色谱鄄线性离子阱鄄静电场轨道阱回旋共振组合质谱法 鉴定乙胺嘧啶在大鼠体内的代谢物 怀彬彬摇 郭春娜摇 李 强摇 郜 进摇 谢 顺摇 黄显会* (华南农业大学兽医学院,国家兽药残留基准实验室,广州510640) 摘摇 要摇 研究乙胺嘧啶在大鼠体内的代谢方式与途径。 大鼠以5 mg/ kg单剂量口服乙胺嘧啶后,在不同时间 点分别采集其血液、尿液和粪便样品。 采用液相色谱鄄线性离子阱鄄静电场轨道阱回旋共振组合质谱仪(LC鄄 LTQ鄄Orbitrap)检测乙胺嘧啶在大鼠体内的代谢物,结合相关代谢软件,共鉴定出10 种代谢产物,主要的代谢 途径包括苯环上的羟基化、N鄄氧化、双氧化、N鄄葡萄糖醛酸结合、甲基化+葡萄糖醛酸结合、羟基化+葡萄糖醛 酸结合和N鄄氧化+葡萄糖醛酸结合。 除乙胺嘧啶3鄄N鄄氧化物已经在大鼠体外代谢研究中被发现外,其余9种 代谢产物均首次在大鼠体内发现。根据其精确分子量及多级质谱的碎片特征,对这些代谢产物的化学结构做 出推断,并建立乙胺嘧啶在大鼠体内的代谢谱系。 研究表明,乙胺嘧啶在大鼠体内的玉相代谢方式主要是羟 基化和N位氧化,域相代谢方式主要是甲基化和葡萄糖醛酸结合。 关键词摇 乙胺嘧啶;大鼠;线性离子阱鄄静电场轨道阱回旋共振质谱;代谢物 1摇 引摇 言 乙胺嘧啶(Pyrimethamine,PYR)又称2,4鄄二氨基鄄6鄄乙基鄄5鄄对氯苯基嘧啶,分子式为C H CIN ,是 12 13 4 一种二氨基嘧啶的衍生物。 二氨基嘧啶类化合物(Dia minopyrimidines)包括许多二氢叶酸还原酶抑制 [1] 剂药物,除乙胺嘧啶外,还有三甲曲沙和吡曲克辛等 ,其中以乙胺嘧啶的抗原虫活性最强。 乙胺嘧啶 主要作用于二氢叶酸还原酶,阻断四氢叶酸的产生,导致核酸合成减少,使得原生生物的细胞核分裂受 阻,繁殖受到抑制。 因此,它被普遍用于疟疾的预防和治疗,另外乙胺嘧啶与磺胺类的联用也被认为是 [2] 针对人畜共患的弓形虫病最有效的治疗方式 。 在兽医临床,乙胺嘧啶还可用于防治禽类球虫病、疟 原虫病和鸡的住白细胞原虫病等。 但是,许多研究表明,乙胺嘧啶对不同动物都表现出生殖毒性或基 因毒性并且有着不同程度的致畸能力[3~7]。 然而,关于乙胺嘧啶在动物体内代谢研究的基础资料却非 [8,9] 常少。除早期少量国外文献对大鼠体外代谢研究中可见代谢物乙胺嘧啶3鄄N鄄氧化物的报道 ,目前, 对乙胺嘧啶在大鼠体内其它代谢方式并不明确,因此难以对乙胺嘧啶做进一步的毒性评估。 随着技术的成熟和发展,高分辨质谱仪越来越多地应用于药物的代谢研究[10~13]。 本研究选用的分 析仪器是线性离子阱鄄静电场轨道阱回旋共振组合质谱仪(LTQ鄄Orbitrap MS),其中LTQ能够获得化合 n 物多级质谱(MS )下的碎片离子,可提供化合物丰富的结构信息,而Orbitrap则保证了高质量精度和分 辨率[14~16] ,再结合药物原型成分的质谱裂解行为和相应分析软件,可快速分析鉴定出可能的代谢产