遗传病的分子诊断汇编.pptVIP

 遗传性疾病的分子诊断 李世宝 sdjnshlb@163.com 一、单基因遗传病的分子诊断 2.单基因遗传病的分类 常染色体显性遗传 常染色体隐性遗传 X连锁显性遗传 X连锁隐性遗传 Y连锁遗传 （一）出生缺陷 指胚胎或胎儿在发育过程中发生的结构或功能的异常。 1.出生缺陷的类型 畸形缺陷 裂解缺陷 发育不良 变形缺陷 （一）出生缺陷 2. 出生缺陷的发生因素 源于受孕前的原因 染色体异常、单基因缺陷、多基因缺陷 源于受孕后的原因 宫内暴露环境因素 不明原因 1. 产前诊断的指征 女方≥35岁，男方≥45岁 不良妊娠史、不良生育史 本人患遗传病或家族中有遗传病患者 遗传检查异常 超声波检查异常 母亲血清学筛查异常 有毒物、射线接触史 孕期有病原感染史、服药史 2. 产前分子诊断策略 (2) 基因诊断 以来源于胎儿的DNA、RNA为原料，检查胎儿基因的存在、缺陷或表达异常 PCR DNA测序 DNA芯片 MLPA技术 3. 非侵入性产前分子诊断 非侵人性产前分子诊断材料 A.经宫颈脱落的胎儿滋养细胞 B.母体外周血中胎儿细胞 滋养细胞、淋巴细胞、粒细胞、有核红细胞 C.母体外周血中胎儿游离DNA (三)单基因遗传病的产前分子诊断 假性肥大性进行性肌营养不良(DMD/BMD) 软骨发育不全(ACH) 苯丙酮尿症（PKU） 3.亨廷顿病的基因诊断方法 基因诊断主要检测(CAG)n重复次数 普通PCR：检测出重复次数较少的小片段 Southern印迹法：分析重复次数很大的样本 (三)常染色体显性遗传病的分子诊断 镰状细胞贫血 (sickle cell anemia, SCA) (三)常染色体显性遗传病的分子诊断 镰状细胞贫血 (sickle cell anemia, SCA) 常染色体隐性遗传病 血红蛋白基因突变导致镰状血红蛋白(HbS)取代正常血红蛋白(HbA) 热带非洲黑人发病率高达40％ 1.镰状细胞贫血的遗传学发病机制 珠蛋白基因第6位密码子GAG变为GTA，HbA的β链第6位谷氨酸被缬氨酸取代，形成HbS 缺氧时，HbS溶解度降低，在细胞内聚合，红细胞变形扭曲成镰刀状 2 镰状细胞贫血的基因分型 纯合子(βSβS)型 没有正常的血红蛋白，病情严重 杂合子(βAβS)型 镰状细胞基因携带者，一般无异常表现，仅在低氧情况下出现镰状红细胞 双重杂合子型 临床症状轻微 3. 镰状细胞贫血的基因诊断方法 限制性内切酶分析法 限制性内切酶MstⅡ DNA印迹法 等位基因-RFLP连锁分析 限制性内切酶分析法 利用内切酶MstⅡ消化待检的DNA样品 正常的βA和突变的βS第5-7位密码子序列： 正常βA ：CCTGAGGAG 突变βS ：CCTGTGGAG 第6位密码A变成T，使Mst II不能识别 (四)X连锁显性遗传病的分子诊断 脆性X综合征 (fragile X syndrome, FraX) X连锁显性遗传病 最常见的遗传性智力障碍 男性群体中的发生率为1/2000～1/1000，男、女患病的比率为2:1 脆性X综合征 1. 脆性X智力障碍基因的结构与定位 脆性X基因(FMR-1)缺陷使FMR-1蛋白(FMRP)生成减少或缺乏，导致脆性X综合征 FMR-1基因位于Xq27.3，在基因组中跨越38 kb，由17个外显子和16个内含子组成 2. 脆性X智力障碍基因的突变特征 FMR-l基因5’端外显子上的非翻译区有一(CGG)n重复序列的多态性结构，正常人群 (CGG)n重复次数在6～50之间 1)FMR-1基因(CGG)n重复序列异常扩增 前突变：(CGG)n重复数为50～200 全突变：(CGG)n重复数200 2. 脆性X智力障碍基因的突变特征 (2) FMR-1基因5’端CpG岛的异常甲基化 FMR-1转录受抑制或减弱，FMRP表达受阻 (3) FMR-1基因的缺失和点突变 FMR-1基因的错义突变和缺失型突变影响 FMRP的正常结构 3. 脆性X综合征的基因诊断方法 1) Southern blot分析 检测(CGG)n的拷贝数和甲基化状态 确认全突变与前突变 适用于患者及携带者的诊断 2) PCR方法 扩增(CGG)n重复序列，检测扩增片段长度 嵌合体患者有较小的(CGG)n片段，也有PCR扩增产物，可导致假阳性 (五)X连锁隐性遗传病