薤白多糖除蛋白工艺条件优化研究 - 江苏农业科学.pdfVIP

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１２期 — ２８５— 张　凤，黄　芳．薤白多糖除蛋白工艺条件优化研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１２）：２８５－２８７． 薤白多糖除蛋白工艺条件优化研究 张　凤，黄　芳 （南京晓庄学院生物化工与环境工程学院，江苏南京２１１１７１） 　　摘要：采用胰蛋白酶脱除薤白多糖中蛋白质，应用响应面分析法对工艺条件进行优化。以蛋白脱除率为考察指 标，选用超声时间、水浴温度、酶液ｐＨ值、酶液用量４个因素，通过Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ试验设计对工艺条件进行优化。结 果表明，薤白多糖最佳脱蛋白工艺条件为：超声时间４５ｍｉｎ、水浴温度３８℃、酶液ｐＨ值８．０、１０ｍＬ体系酶液用量 ０．８０ｍＬ，在此条件下蛋白脱除率为８８．２５％，与模型的预测值８８．８５％基本一致。 　　关键词：胰蛋白酶；响应面；脱蛋白；薤白；多糖；工艺优化 　　中图分类号：ＴＳ２０１．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１２－０２８５－０３ 　　薤白（ＡｌｌｉｕｍｍａｃｒｏｓｔｅｍｏｎＢｕｎｇｅ），别名野蒜、小蒜、小根 ４０目筛 精密称取粉末 加适量蒸馏水超声辅助提取 离 → → → 蒜、苦蒜等，是百合科葱属多年生草本植物，其鳞茎上屉蒸至 心 过滤 滤液减压浓缩 乙醇沉淀（乙醇浓度８０％） 真 → → → → ［１－３］ 半熟后晒干或烘干入药称作薤白 。据《本草纲目》记载， 空干燥 薤白粗多糖 精密称取０．１ｇ ５０ｍＬ容量瓶定 → → → ［４］ 薤白具有瘀血可散、胸痹刺痛可愈、中恶猝死可救等作用 。 容 多糖溶液，备用。 → 薤白多糖是薤白的主要活性成分之一，具有抗菌、抗氧化等功 １．２．２　胰蛋白酶脱除薤白多糖蛋白质的工艺　移取薤白多 ［５］ 能。关于薤白中多糖的提取已有报道 。多糖提取方法较 糖溶液５ｍＬ，置于锥形瓶中，与ｐＨ值８．０、浓度为５００Ｕ／ｍＬ 多，但在提取过程中，常伴随有一定的蛋白质会吸附多糖，影 的胰蛋白酶酶液分别同时放入３７℃的水浴锅内预热１０ｍｉｎ。 响后续试验中多糖的分离纯化［６－７］，因此选择蛋白去除率高 向多糖溶液加入０．８０ｍＬ酶液，定容至１０ｍＬ后置于３８℃水 且多糖损失率小的除蛋白方法是关键环节。研究表明，酶法 浴中超声４５ｍｉｎ脱除蛋白。之后，将溶液放入 １００℃水浴锅 脱蛋白是一种脱蛋白效率高、操作简单、多糖损失小的有效脱 中灭酶１０ｍｉｎ，冷却至室温，１４０００ｒ／ｍｉｎ高速离心１０ｍｉｎ，收 ［８］ 蛋白方法 。本研究采用胰蛋白酶对薤白多糖中蛋白质进 集上清液，测定蛋白含量。 ［９］ 行去除，通过响应面试验设计优化了酶法脱除薤白多糖中蛋 １．２．３　蛋白质含量的测定　采用考马斯亮蓝法 ：以牛血 白质的工艺条件，这也可为其他多糖除蛋白工艺研究提供一 清蛋白为标准品，在５９５ｎｍ条件下测定吸光度，得回归方程 定的参考。 ｙ＝０．０２９３ｘ＋