利用cdna-aflp技术获得小麦耐盐性相关基因tavha-c.doc

PAGE 1738 中 国 农 业 科 学 39卷 9期 秘彩莉等：利用cDNA-AFLP技术获得小麦耐盐性相关基因TaVHA-C PAGE 1737 中国农业科学 2006,39(9):1736-1742 Scientia Agricultura Sinica 收稿日期：2005-03-21；接受日期：2006-07-05 基金项目：国家自然科学基金资助 作者简介：秘彩莉（1974-）女，河北无极人，博士，研究方向为小麦抗逆分子生物学。通讯作者刘旭（1953-），男，河北定州人，研究员，博士，研究方向为小麦近缘种属的研究和利用。Tel: 010E-mail: xuliu@ 利用cDNA-AFLP技术获得小麦耐盐性相关基因TaVHA-C 秘彩莉1,2，张学勇1，温小杰1，刘 旭1 （1中国农业科学院作物科学研究所/农业部作物品种资源与生物技术重点实验室，北京100081； 2河北师范大学生命科学学院，石家庄 050016） 摘要：【目的】利用cDNA-AFLP技术对耐盐性受主效基因控制的小麦品系98-160盐胁迫前后基因表达的变化进行分析。【方法】对112个克隆的cDNA差异表达片段进行了Blast-x分析。【结果】约有65.2%的片段与已知基因有较高的同源性，从中筛选出18个与小麦耐盐性密切相关的片段，主要包括转录因子、与离子转运有关的蛋白、信号传导相关蛋白、胁迫相关蛋白以及与蛋白-蛋白相互作用有关的蛋白。以94号片段为基础，通过电子延伸和RT-PCR，克隆了小麦液泡膜ATPaseＣ亚基（TaVHA-C）的全长cDNA，Northern结果表明，在胁迫的早期（0～2 h）TaVHA-C基因的表达基本不变，随着胁迫时间的延长（6～12 h），TaVHA-C基因的表达逐渐减弱，以后（24～72 h）又逐渐增强。低温对TaVHA-C基因的表达有明显的抑制作用。【结论】利用cDNA-AFLP技术分离差异表达片段进行相关基因的研究是可行的。 关键词：小麦；耐盐性；cDNA-AFLP；TaVHA-C Isolation of TaVHA-C, A Gene in Wheat Related to Salt-Tolerance via cDNA-AFLP BEI Cai-li1,2, ZHANG Xue-yong1, WEN Xiao-jie1, LIU Xu1 (1Crop Science Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences / Key Laboratory of Crop Germplasm Resources and Biotechnology, Ministry of Agriculture, Beijing 100081; 2 Life Science Academy of Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016 ) Abstract: 【Objective】 98-160 is a wheat line with excellent salt-tolerance that is controlled by major genes. The expression profiles of 98-160 stressed by salt for different times were studied via cDNA-AFLP.【Method】 One hundred and twelve differentially expressing cDNA fragments were obtained, which were sequenced and analyzed by Blast-x. 【Result】 One hundred and twelve fragments were cloned and sequenced. The Blastx analysis showed that 62.5% of the sequenced fragments were similar to known genes in the database, in which 18 cDNA were tightly related to wheat salt tolerance, most of them were transcription factor, transportation related protein, signal