研究报告大肠杆菌来源的人乳头瘤病毒11 型病毒样颗粒的 - coreacuk.pdfVIP

Re se arch Pap er 研究报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 49 ( 11) :1527 - 1533 ; 4 November 2009 ISSN 0001 - 6209 ; CN 11 - 1995Q http :journals. im. ac . cnactamicrocn 大肠杆菌来源的人乳头瘤病毒 11 型病毒样颗粒的制备及其免 疫原性 杨春燕 , 李少伟 , 王晋 , 魏　希 , 黄博 , 庄玉娣 , 李仲艺 , 潘晖榕 , 张军 , 夏宁邵 (厦门大学生命科学学院 , 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 ,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 , 厦门　361005) ( ) 摘要 :【目的】利用大肠杆菌表达系统制备人乳头瘤病毒 11 型病毒样颗粒 HPV11 VLPs ,并对其免疫原性和 所诱导中和抗体的型交叉反应性进行研究 。【方法】在大肠杆菌 ER2566 中非融合表达 HPV11L 1 蛋白,并通 过离子交换层析 ,疏水相互作用层析其进行纯化 。纯化后的 HPV11L 1 经体外组装形成病毒样颗粒 ,通过动 态光散射 ,透射电镜检测其形态 ,并通过多种 HPV 型别假病毒中和实验评价 HPV11 VLPs 的免疫原性及型交 叉反应性 。【结果】HPV11L 1 蛋白在大肠杆菌中可以以可溶形式表达 。经过硫酸铵沉淀 、离子交换和疏水相 互作用色谱纯化 , 目的蛋白纯度能够达到 95 %以上 。纯化的 HPV11L 1 蛋白去除还原剂 DTT 后 ,能够在体外 自发组装成为直径约 50 nm 、与天然病毒颗粒形态高度相似的VLPs 。动物实验结果显示 ,该病毒样颗粒在小 ( ) μ 6 鼠体内的中和抗体半数有效剂量 ED50 为 0031 g ,在小鼠体内可诱导高达 10 的中和抗体滴度 ,这些中和 抗体与 HPV6 有较好的交叉反应 ,与 HPV18 有一定的交叉反应 ,而与 HPV16 没有明显的交叉反应 ,这一结果 与分子进化树的分析相一致 。【结论】本研究利用原核表达系统获得了具有较高免疫原性的 HPV11 VLPs , 为 HPV11 预防性疫苗的研制奠定了良好的基础 。 关键词 : 人乳头瘤病毒 11 型 ; 大肠杆菌表达系统 ; 病毒样颗粒 ; 免疫原性 ; 型交叉中和 中图分类号 :R37 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2009) 　　人乳头瘤病毒 HPV ( Human Papillomavirus , HPV) 全 、有效的 HPV11 预防性疫苗可大大减少尖锐湿疣 ( ) 的发病率 ,具有良好的社会及经济效益 。 属乳头瘤病毒科 Papovaviridae 乳头瘤病毒属 ,为无 包膜 DNA 病毒 ,主要引起人类皮肤粘膜的增生性病 由于 HPV 具有严格的种属特异性且其增殖严 变 。高危型 HPV (如 HPV16 , 18) 等主要引起宫颈癌 格依赖于宿主细胞的分化状态 ,使得其难以在体外 等生殖器部位的恶性病变 。低危型 HPV 感染主要 培养 。目前仅有少数几种 HPV 能够通过裸 鼠组织 引起皮肤 ,粘膜的良性疣状病变 ,其中尖锐湿疣是仅 移植等复杂手段进行增殖[2 ] 。这就使得传