第六章兽药残留检测技术抗生素类58.pptVIP

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第六章 兽药残留检测技术 第四节 抗生素类药物残留的危害分析与检测方法 一、氨基糖苷类 二、四环素类 三、氯霉素类 四、大环内酯类 五、林可霉素类 一、氨基糖苷类抗生素 氨基糖苷类抗生素是由链霉菌或小单孢菌培养液中提取,或以天然品为原料半合成制取而得的一类水溶性较强的碱性抗生素。包括链霉素、双氢链霉素、新霉素、庆大霉素、卡那毒素、阿米卡星、阿布拉霉素、斑伯霉素、妥布霉素、壮观霉素等,结构式见图。 由于其分子结构中都有一个氨基环醇环和一个或多个氨基糖分子,由配糖键相连接,因此最好称为氨基糖苷-氨基环醇类(Aminoglycoside-Aminocyclitol)抗生素,但因氨基糖苷类抗生素这一名称沿用已久,故仍用此名。 从抗菌作用的特点看,氨基糖苷类是一类较优良的抗生素,然而,该类药物的治疗浓度范围窄,不良反应较常见,主要为肾毒性、耳毒性、神经肌肉阻滞、造血系统毒性反应和过敏性反应,其中有些是不可逆毒性。 氨基糖苷类肌肉注射或静脉滴注吸收,内服后不吸收或很少吸收。与血浆蛋白结合很少,主要分布在细胞外液。 肾脏皮质内药物浓度可超过血药浓度10~50倍,也可进入内耳外淋巴液,其半衰期较血浆半衰期长5~6倍。 氨基糖苷类药物在体内几乎不被代谢,约90%以原形经肾小球过滤排出, 尿药浓度极高,约为血浆峰浓度的25~100倍。 例如:卡那霉素 卡那霉素对耳毒性、肾毒性的发生率较高,仅次于新霉素。 卡那霉素肌注,1h血药浓度达峰值,血浆蛋白结合率很低。用药后24h内有90%的药物经肾以原形排泄。 卡那霉素可透过胎盘进入羊水和胎儿循环中,在牛奶中可检测到。 牛、羊、猪肌注,1日5~10mg/kg,分为2次给予,间隔12h, 36h后牛奶中观测不到卡那霉素残留,肾脏中药物滞留期长。 链霉素、双氢链霉素 链霉素和双氢链霉素对肾毒性反应稍轻,但可引起神经性紊乱,如听力减退、耳鸣或耳部胀滞、眩晕、麻木、针刺感、面部灼伤感;偶可发生生理力减退、皮疹、乏力、呼吸困难等。 链霉素和双氢链霉素内服吸收差,大部分以原形随粪便和尿液排出。 牛、羊、马肌注后,血药浓度于1h达到峰值。一次肌注有效浓度可维持12h。24h内,30%~90%的药物以原形经肾排出。 注射部位和肾脏中链霉素残留滞留期较长,其他可食部分残留量低,停药期不必很长。 乳牛肌注双氢链霉素后不久,乳汁中残留量很低,在0.05~0.13ng/g间。乳房注入不吸收,药物滞留期应予注意,以免乳汁中残留超标。 壮观霉素、新霉素 壮观霉素毒副作用较小,无明显的耳毒性,但可引起肝、肾和血液系统紊乱,偶可发生过敏性反应。 壮观霉素主要以原形药物由肾排泄,半衰期约为2.5h。肝和肾中代谢物主要为双氢壮观霉素和壮观霉素。肝和肾中药物残留量高,滞留期约15天。 新霉素几乎不被胃肠道吸收,乳腺很少吸收。药物不经胃肠道给予, 体内药物生物转化很小。内服大部分以原形随粪便排出,注射吸收迅速,很快随尿液排出。 新霉素在动物可食部分、鸡蛋、牛奶中药物滞留期长应予注意。 (一)样品处理 生物样品预处理 生物样品预处理是除去混杂物以免污染色谱柱和干扰氨基糖苷类的分离、分析。 样品的预处理包括脱脂除蛋白、提取、净化和样品浓缩。 生物样品中氨基糖苷类药物仍具有水溶性质,难以用有机溶剂提取,因此首先必须用蛋白沉淀剂或固相萃取柱除去生物组织(如蛋白质、脂肪等)。 含脂高的生物样品一般在提取前先除去脂类。 体液样品脱脂可采用离心或正己烷提取。 固态样品(如肌肉、肾、肝)处理相对复杂些,包括匀浆、提取/脱脂等步骤。 除蛋白的方法: 一是沉淀法,即在样品溶液中加入甲醇/盐酸溶液沉淀蛋白质。 二是酸提取法,即在样品中加入三氟乙酸、三氯乙酸、三氯乙酸/柠檬酸盐、高氯酸溶液沉淀蛋白质,将生物样品与酸溶液混匀或一起均质。某些情况下,如测定肾脏中阿布拉霉素,还需用浓氢氧化氨溶液对蛋白进行水解,保证有较好的样品回收率。蛋白水解包括酸解法或碱解法,上清液再经中和。 三是超滤法,经超滤法处理后的样品不会引入新的盐类污染及假色谱峰。 四是固相萃取法,这是近年来在残留分析中应用最广的一种快速、简便的除蛋白方法。 1、提取 用高或低的pH值介质可有效提取生物样品中氨基糖苷类药物。 酸性介质:三氯醋酸、三氟醋酸、高氯酸、三氯醋酸-柠檬酸或甲醇-高氯酸溶液与样品一起均质、提取。 碱性介质:如甲醇-氢氧化氨溶液提取猪肾组织中的阿布拉霉素。 食品中氨基糖苷类药物的提取,可加入碱性缓冲液,并加热脱去蛋白,达到提取的目的。 2、净化 净化方法包括液-液分配、固相萃取和基质固相分散技术(MSD)、在线痕量富集法等。 有时为了达到更好的净化效果,通常将几种方法结合应用。 液-液分配是将干扰组分从水相直接转移至有机相中。 由于氨基糖苷类的高极性,在pH范围内不能被提取到有机相中,

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