坛紫菜别藻蓝蛋白α亚基基因的原核表达与鉴定左正宏 - 水生生物学报.pdf

第 30 卷 第 3 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 3 0 ,No . 3 2 0 0 6 年 5 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA May , 2 0 0 　6 α 坛紫菜别藻蓝蛋白 亚基基因的原核表达与鉴定 左正宏 　李博文 　聂鑫怡 　王重刚　陈奕欣 ( 厦门大学生命科学学院 ,厦门　361005) α ( ) 摘要 :通过 PCR 的方法从重组质粒 pMD apcAB 中扩增坛紫菜别藻蓝蛋白 亚基基因 apcA ,并将其克隆到高效表 ( ) 达外源基因的原核表达质粒 p TOT7 。将构建好的质粒导入表达型大肠杆菌 BL21 DE3 , IPTG 诱导表达 ,并对表达 α ( ) 产物进行 Westernblot 和质谱鉴定 。结果显示 : apcA 全长 486bp ,表达的 亚基 apcA 为带有原核表达载体 T7g10 的 12 个起始氨基酸的融合蛋白,其分子量约为 197KD 。05mmol/ L 的 IPTG 在 37 ℃诱导 6h 时 , apcA 的表达量达到最 大 ,达菌体总蛋 白 50 % 以上 。Westernblot 和质谱鉴定的结果表明获得的融合蛋 白为重组坛紫菜别藻蓝蛋 白α 亚基 。 关键词 :坛紫菜 ;别藻蓝蛋白;原核表达 ;Westernblot ( ) 中图分类号 :S9454 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2006 ( ) α ( α) 　　藻胆蛋白 Phycobiliproteins ,PBP 是存在于某些 够高效表达坛紫菜别藻蓝蛋白 亚基 APC 的原 ( ) 藻类藻胆体 Phycobilisomes ,PBS 中的一类进行光合 核表达载体 ,并优化表达条件 ,对表达的融合蛋白进 作用的捕光色素蛋白。根据藻胆蛋白结构和光谱特 行 Westernblot 和质谱鉴定 , 以期为进一步研究别藻 ( ) 性 ,可分为 3 类 : 藻红蛋 白 Phycoerythrin , PE 、藻蓝 蓝蛋白的功能提供基础材料 。 ( ) ( 蛋 白 Phycocyanin , PC 和 别 藻蓝 蛋 白 Allophyco 1 　材料与方法 cyanin ,APC) 。别藻蓝蛋 白在藻体光合作用中起重 要作用 ,其主要负责把来 自藻胆体天线杆的光能传