纤维素酶生产的研究进展论文.pdfVIP

酶制剂蔫淼烈罐糕需而丽丽『—————————————一 纤维素酶坐庐的研究进展 陈清华1，冯钦龙2，周辉2 (1．湖南农业大学动物营养研究所，长沙410128 2．湖南尤特尔生化有限公司，岳阳414009) 摘要：饲料纤维素酶是开发和利用纤维素作为动物营养源的关键，其研究和应用前景广阔。 随着现代生物技术的应用和发展，饲料纤维素酶将在未来的动物生产中产生不可低估的作用。 本文就产纤维素酶菌株的选育、液体深层发酵生产工艺流程、纤维素酶理化特性等方面的研 究最新进展进行了综述。 关键词：纤维素酶；菌株选育；生产；酶学特性 纤维素是世界上最丰富的可再生自然资源。我国每年仅作物秸秆的纤维产量就达2亿t以上。有 效开发和利用纤维素作为饲料来源，是解决我国饲料资源紧张、人畜争粮这一突出矛盾的关键，也是 们在纤维素的转化方面进行了大量的研究。初期人们主要通过自然分离的方法获得纤维素酶生产菌； 随着现代生物技术的发展，为适应现代化工业生产的需要，纤维素酶菌种选育的方法和手段也日新月 异，诱变、原生质体融合和基因工程等已成为目前主要采取的手段。国外对纤维素酶的研究有近40多 年的历史，纤维素酶产生菌主要有术霉、青霉和曲霉等，其中里氏木霉Ru￡c_30被认为是最好的纤维 素酶产生菌之一。我国对纤维素酶的研究和生产也已开展了广泛的研究，但大多数是采用固体发酵， 发酵水平不稳定，且不适于大规模生产。 1纤维素酶的种类 纤维素酶是指能水解纤维素8-1，4葡萄糖苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称， 它不是单一酶，而是起协同作用的多组分酶系。习惯上将纤维素酶分成三类：(1)c1酶：这是对纤维 素最初起作用的酶，它破坏纤维素链的结晶结构，起水化作用，即cl酶是作用于不溶性纤维素表面， 使结晶纤维素链开裂、长链纤维素分子末端部分游离和暴露，从而使纤维素链易于水化；(2)Cx酶： ，4键的纤维素酶。主要包括内切口-1，4-葡聚糖酶和外切1，4-6- 意位置切开8—1，4键，主要生成纤维二糖、纤维三糖等。后者 出葡萄糖；(3)D-葡萄糖苷酶：即为将纤维二糖、纤维三糖 纤维素酶 E．C3．2．1．4，来自真菌简称EG；来自细菌简称L一)，这类酶一般作用于纤维素内部的非结晶区，随机 糖苷酶(口一1，4-加cosidase，E．C3．2．1．2l，简称BG)，这类酶一般将纤维二糖水解成葡萄糖分子。上述两 种分类条件下的三种纤维素酶在分解纤维素时，任何一种酶都不能裂解晶体纤维素，只有三种酶共同 存在并协同作用时，才能完成水解过程(Biely等，1992；Hazlewood等，1998a)。 2菌株选育 菌株选育是纤维素酶生产的基础性工作，国内外许多专家进行了大量研究，也取得了很大的进展。 NT．15、黑曲霉XX．15A，采用紫外线、特定电磁波辐射、线性加速器、亚硝基胍等物理、化学的诱变 W／30 925、J-931，经过浓度为2％硫酸二乙酯和紫外线(15cm／2min)反复诱变后，得到了产酶活性高 后，将处理过的孢子接种于纤维双层平板上，30C培养5～8d，15％放置7～10d，挑选透明圈直径和 菌落直径比较大的单菌落进行三角瓶固态发酵再筛选，得到了产纤维素酶活力很高的里氏木霉91．3 菌株。 随着生物技术的发展，对菌种的基因克隆成为纤维素酶研究中一个热点，目前研究最深入的是里 氏木霉(T．reesei)。已知里氏木霉基因组上至少存在5个结构不同纤维素酶基因，并已全部被克隆测 序。大多数克隆的纤维素酶基因能在大肠杆菌中表达出可检测的EG和CBH活力。这种表达不需用载 体的启动子，但如果这些基因同高效表达基因的启动子和染色体起始位点融合，则表达量增加。在大 肠杆菌中表达纤维素酶基因，还存在着两个重要问题，一是提取困难，二是表达水平低，所以在纤维 素酶基因的表达方面，人们将目光转向了真核生物表达系统。目前应用较多的是酵母表达系统。酵母 作为一种传统的工业微生物，不产生毒素，用其表达纤维素酶基因产物，能使其高度糖