第九章-配子与胚胎生物工程技术.pptVIP

配子与胚胎生物工程概述 胚胎移植技术 其他胚胎工程技术概述 配子与胚胎生物工程也称胚胎生物技术或胚胎工程技术，主要是对动物的卵子、精子和胚胎在体外条件下进行各种操作，以加速繁育经济动物，培育优良品种，或挽救濒危动物使用的一系列工程技术方法。 研究内容 胚胎移植 胚胎冷冻保存 体外受精 动物克隆 转基因技术 性别控制 胚胎干细胞技术 胚胎嵌合技术 胚胎冷冻 体外受精 动物克隆 转基因技术 性别控制 胚胎干细胞 嵌合体技术 胚胎冷冻 胚胎的冷冻保存，是将胚胎贮存在－196℃超低温下长期保存的方法。 20世记70年代试验成功 是胚胎移植技术的重大突破，使胚胎移植不受时间和地点的限制，从而扩大了胚胎移植技术的效率。 是长期保存优良母牛基因最可靠的技术措施。 体外受精 试管动物技术即胚胎体外生产技术，是相对于体内胚胎而言的,是指卵母细胞在体外成熟后与获能的精子体外受精并分裂发育到桑椹胚或囊胚期(5-7天)的技术。 克隆定义 clone，愿意为树木的枝条，在生物学中指一个细胞或个体以无性繁殖的方式产生一群细胞或一群个体，在不发生突变的情况下，具有完全相同的遗传性状，常称无性繁殖(细胞)系。 克隆==无性繁殖。 细胞核移植技术（NT），就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖就可被激活、分裂并发育成新的个体，使得核供体的基因得到完全复制。 依供体核的来源可分为：胚细胞核移植、胚胎干细胞核移植与体细胞核移植。 转基因技术 转基因动物就是用实验室方法将人们需要的目的基因导入动物胚胎或配子，使外源基因与动物本身的基因整合在一起，并随细胞的分裂而增殖，在动物体内得到表达，并能稳定地遗传给后代。 性别控制技术 定义 性别控制指通过人为干预并按人们的愿望使雌性动物繁殖出所需性别后代的一种繁殖新技术。 对高效优质的发展畜牧业具有重要意义： 可使受性别限制的生产性状（如泌乳性状）和受性别影响的生产性状（如肉用、毛用性状等）能获得更大的经济效益； 嵌合体 嵌合体 (chimera)一词源于古希腊神话，其意是指狮头、羊身、龙尾等部分拼凑起来的怪兽。 中国的“龙”：九似 图腾 “龙角似鹿、头似驼、眼似鬼、项似蛇、腹似蜃、鳞似鲤、爪似鹰、掌似虎、耳似牛” 嵌合在生物学上是指同一个体中，基因型相异的细胞或组织混合存在的状态。 骡子—天然嵌合体？ 孕酮能够抑制腺垂体释放FSH，每日肌注或口服孕酮，或经阴道海绵栓给予孕酮或其类似物，一般处理12-18天后，可以抑制卵泡发育。停止处理或撤除海绵栓后，孕酮的抑制作用消失，卵巢上即有卵泡发育，通常在2-3天内发情。 为了提高排卵的效率，在孕激素处理结束的前一天，可以给予小剂量的FSH。 此法费用低，但处理时间长。 3.2.2 孕激素处理法 4.1 冲胚液和保存液的制作 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。 4.胚胎的收集 4.2 回收过程 牛适宜于5-7日龄胚胎; 现均采用二通管非手术采卵法：用直肠把握子宫颈法插入带有探针的二通管直至一侧子宫角的基部，通过打气孔注入8--10ml空气,抽出探针，通过中心管道反复注入--回收冲卵液,连续5--6次。同样方法冲另一侧子宫角。 子宫角回收的液体较多，可以通过专用胚胎漏斗除去多余的冲卵液，在连续变倍解剖显微镜（实体显微镜）下进行检胚； 胚胎的质量评定：主要采用形态学方法，优质胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植。 5.胚胎的检查和评定 A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中； B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好； C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多； D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。 5.1 胚胎的分级标准 5.2 不同发育阶段的正常胚胎 5.3 未受精卵或异常胚胎 2-cell 4-cell 8-cell 16-cell Morula Blastocyst 5.4 正常胚胎的形态 6.胚胎的移植 重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。 牛站立保定于六柱栏保定架内，用2%盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用18号针头，每只牛约5ml。 6.1受体母牛的准备  1.1ml注射器 2.装管接头 3.细管 A.棉塞 B.气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段 装管器械和装管方法 6.2 胚胎的移植方法 直肠把握法 2003年9月4日降生的良种胚胎移植牛