载体介导siRNA抑制人RA滑膜细胞NF-κB基因表达的研究.pdfVIP

摘 要 目的设计、合成核转录因子-rappaB(Nuclear transcription 小分子干扰RNA(smallRN～siRNA)表达载体，转染人类风湿关节炎 interfering (Rheumatoid 成的siRNA表达载体，以探索抑制RA炎症进展和关节破坏的新途径。 方法RA滑膜细胞源自RA滑膜切除组织，经分离、消化、培养和传代后备用。根 据GeneBank中人NF-r,B 的干扰序列(1#～钳)及对照序列，构建siRNA pGenesil．1／NF-r．B表达载体，以复 Transfection 合阳离子脂质体Effectene Reagent为介导，转染重组真核表达载体 NF-r．B fluorescent chain polymerase qUantitive mRNA相对表达水平，分析重组真核载体的干扰效果。 h、72 结果NF-r,B真核表达载体pGenesil．1／NF-r．BsiRNA转染入滑膜细胞12h、48 Transfection h、5d和7d后，观察到阳离子脂质体Effectene Reagent对细胞毒性小， 转染后细胞在形态学上没有差别，对细胞生长没有明显影响。荧光定量聚合酶链反应 测定各时间段各组人滑膜细胞NF-r．BmRNA的表达，结果发现转染后12小时内即 可检测到干扰效应，48～72小时干扰效应最强，此后活性逐渐降低，持续时间达7 转染对照组、阴性对照组相比，有明显的抑制效果。 达。 硕士研究生 侯春风(风湿病) 指导教师 王吉波教授 关健词： 类风湿关节炎核转录因子-KBpGenesil．1表达载体 RNA干扰荧光定量聚合酶链反应 and small oBJECTIVE：To designsynthesizeinterfering humanneuclear constructsiRNA transcriptionfactor-kappaB(NF·KB)，thenexpression transfectinto vector(pGenesil一1／Sil心tA humanrheumatoid plasmid)，and arthritis(RA) cells，SOasto theeffectivesiRNAwhichcould blockthe synovial identify specifically NF一1cB can theoreticalbasisforRA NF-r,．B production．Whichprovide genetherapyby smallRNA interfering． M唧oDS：RA wereisolatedand fromRA cells synovial digested synovectomy