SELEX技术及其应用的研究进展.pdfVIP

2008年 11月第46卷第 33期 · 综 述 · SELEX技术及其应用的研究进展 罗正良 严鹏科 (审校) (南华大学 药物药理研究所，湖南衡阳421001) 摘【要】SELEX技术近年来不断完善与发展 ，应用领域不断扩宽，筛选的适配子不断优化，使该技术在疾病的诊断、治疗及药 物的开发等方面更具潜在价值。 关【键词】SELEX；适配子 ；应用 [中图分类号】Q7 [文献标识码】A 文【章编号】1673—9701(2008)33—55—03 TheDevelopmentofSELEX and itsApplication LUO Zheng~ang YAN Pengke InstituteofPharmacyandPharmacology，UniversityofSouthChina，HengYang421001 [Abstract]SELEX(systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment)havebeenmodifiedanddevelopedinrecentyearsanditsap— plicationareahasbeenexpandedandhteaptamers havebeenoptimized，whichhavemadeitenhancethepotentialvalueintherapyanddevel- opinganew drug． K【eyWords】SELEX；Aptamers；Application SELEXR技术即指数富集的配基系统进化技术 (Systematic 及其他酶学反应相关引物的结合位点。在随机文库中，单链随机 EvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment，SELEX)。利用该 寡核苷酸分子易形成多种三维空间立体结构 ，几乎能与自然界 技术可以从随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度 所有存在的种类分子作用。尤其是RNA分子易形成发夹、假节、 亲和的核酸适体(Aptamer)t--。自Tuerk等首先运用此技术筛选到 鼓包、茎环、G一四聚体等二级结构，更容易与蛋 白质、核酸等物 特异性吸附噬菌体T4DNA聚合酶和有机染料分子的特异寡核 质特异性结合，但在体内易被核酸酶降解，必须进行修饰如嘧啶 苷酸配基后，经过十几年的发展，SELEX技术已经成为一种重要 环的2’2F和2’2NH修饰等。DNA相对RNA生产成本低，体 的研究手段和工具。目前涉及多种疾病治疗的适配子已被筛选 内较稳定，不易被降解，所构建的文库筛选出的适配子更适合体 出来 ，且疗效已通过体外实验或动物模型得到证实。两个适配子 外诊断和体内治疗。 已进入药物 III期临床实验阶段，还有很多适配子正处于预临床 实验阶段 ，部分将很快进入临床实验。本文就SELEX技术及其 2 SELEX技术特点 应用的最新研究进展进行综述。 (1)库容量大，适应范围广泛；对靶无限制，包括蛋白质、核 酸、小分子有机物，甚至金属离子等。 1 SELEX技术原理 (2)高分辨率。根据Jenison等的研究结果，用茶碱筛选得到 SELEX技术的基本思想是体外化学合成一个单链寡核苷酸 的aptamer与茶碱结合的解离常数Kd为0．1 molL／，是其与咖 库 ，用它与靶物质混合 ，混合液中存在靶物质与核酸的复合物， 啡因的1000倍 ，尽管茶碱与咖啡因的差别只是在嘌呤环N7位 洗掉未与靶物质结合的核酸，分离与靶物质结合的核酸分子，以 置上有无甲基。 此核酸分子为模板进行PCR扩增，进行下一轮的筛选过程。通过 (3)高亲和力。以蛋白质为靶物质，筛得aptamer的解离常