弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书-上海伟进生物科技有限公司.PDF

弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书 上海伟进生物科技有限公司 一、定义： 弗氏佐剂（Freundadjuvant ）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量 混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温 80 ）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。如在不完全佐剂中加入分枝 杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。 二、制备方法： 弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂 混合而成，组分比为 1 ～5 ：1 ，可根据需要而定，通常为2 ：1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为 2 ～20mg/ml)或死 的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA ）。一般首次注射时用1 ／2 体积 FCA 加上 1 ／2 体积的抗原进行乳化，第 二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂，则抗原量增大 10-20 倍。 配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置 4℃下保存备用。 在免疫动物前 ，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1 ：1 ，制备成油包水乳状液。因为含 SDS 很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及 免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。一般是每兔（约 2kg 重）或每羊（约 20kg 重）第 1 次注射抗原 1mg ，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。佐剂与抗原乳化可按如下方法进行： （1 ）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一 方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适 于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。 （2 ）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净 空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于制备少量的 抗原乳剂。但同时难以乳化完全，个别抗原，用塑料注射器根本推不动，而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经 鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水 剂。 （3 ）超声：实验室条件好点的，比如说有超声破碎仪的，一定要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对 抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。 三、其他免疫佐剂的物质 弗氏佐剂也属于免疫佐剂。其他免疫佐剂的物质有：①微生物及其产物，常用的微生物有分枝杆菌、短小棒状杆菌、百 日咳杆菌以及处左兰氏阴性杆菌的提取物脂多糖，自分枝杆菌的提取物质胞壁酰二肽等。②多聚核苷酸，如多聚肌苷酸： 胞苷酸（poly1:C ）,多聚腺苷酸 （poly1:A ：μ）等;。③无机物，如明矾及氢化铝等。 佐剂的作用机制尚不完全清楚：①它可能增加抗原的表面面积，易为巨噬细胞所吞噬；②延长抗原在体内的存留期，增 加与免疫细胞接触的机遇；③诱发抗原注射部位及其局部淋巴结的炎症反应，有利于刺激免疫细胞的增殖作用。 四、区别： 弗氏不完全佐剂 产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，含结核分枝杆菌的细胞壁成分。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续 释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完 全佐剂用于加强免疫。 弗氏完全佐剂 产品简介：弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆 菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。 五、储存： 储存在低温，通风的区域。