洗涤方法和冻存温度对外周血单个核细胞内HCV RNA含量的影响.pdfVIP

● 论著 ● 洗涤方法和冻存温度对外周血单个核细胞内 HCV RNA含量的影响 钟华平赵伟 沈玲薛蓉吴引伟殷艳天 【摘要】 目的分析洗涤方法和冻存温度对外周血单个核细胞(PBMC)内HCVRNA含量的 影响。方法收集同一天内17例血清HCVRNA阳性慢性丙型肝炎患者PBMC，随机分成A组(6 例)和B组(11例)，A组把细胞分成2份后分别采用常规法及改良法洗涤细胞5次，并留取每次洗涤 液及细胞；B组采用改良法洗涤细胞后把细胞分成2份，分别作为新鲜组和一20℃冻存组，然后采用 离心柱型RNA提取法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测洗涤液和细胞中HcVRNA含 量。结果(1)洗涤完3次时，常规法有1份洗涤液HCV为阳性，改良法均为阴性；与第1次洗涤液 RNA含量 相比，改良法再洗涤1次的病毒含量下降幅度明显高于常规法；(2)新鲜组与冻存组HCV 不存在明显差异。结论洗涤PBMC以采用改良法洗涤3次为宜；一20℃简易冻存6周的PBMc标 本仍可用于FQPCR检测。 【关键词】 外周血单个核细胞；丙型肝炎病毒 【中图分类号】R512【文献标识码】A 【文章编号】0253—3685(2008)06一0555一03 Eff酏bof methodand HCVIHAiIl b100d w鹤hiIIg o伽出tion∞detectiIIg peripheral pre辨nriIlg Imn蚰uclear ceIIs刁．彳CwG胁纪历凡g，刀MDw“，删Lm，Pf口f．A所妇把d＆co碰H∞讲衄fD， №巧i怄，^矧i∞fCDff俘，跖Mf砌盯咖i比例砂，№可岫210009，CmM Tb theeffectsof methodand conditionon 【Abstract】objective preserving investigate washing HCVRNAin bloodmononuclearcells(MC)．MethodsTheMCsof17chronic detecting peripheral C withser啪HCVRNA wereisolatedanddivided into A hepatitispatients positive randomlygroup conventionalmethodand (6cases)andB(11cases)withinthes锄eday．IngroupA，twomethods，a a∞dified usedtowashthe method，Ⅵ陀re cells“ve collectingeach、^忸shing times，respectively，for andallcells．In cellswerewashedthemodifiedmethodanddioidedintot、vo liquid gmupB，the using fresh andtheotherasafrozen RNA、vasextractedfromeach parts，thegmup group．After washing all andMCs，HCVRNAwasdetectedbyfluorescence liquid quantitative_PCR(FQ—PCR)．R怖Illts theMCswere、vashedf