Mant基因导入棉花基因组的分析.pdf

华中农业大学2005屈硕士论文 摘要 甘露糖基转移酶(mannosyl 普遍存在于高等真核生物的基因组中，其编码产物的基本功能是将甘露糖从GDP一甘 露糖转移到长醇一磷酸酯上，形成长醇磷酸甘露糖。在内质网泡内，长醇磷酸甘露 糖则是N一糖基化途径、糖磷脂酰肌醇膜固定途径以及蛋白质的O一甘露糖基化的甘 i ect 露糖基的供体。甘露糖也是聚唾液酸和植物外源凝集素(1 n)的成分，而这两 种甘露糖蛋白又是植物的细胞壁成份之一，他们都与植物的抗虫和抗病性有关。因 此甘露糖代谢的异常，也会导致植物对病原微生物及害虫抗性特征的改变以及植物 本身生长发育的异常。本研究利用脚nt基因的编码序列与花药特异启动子、含增强 子四联体的花药特异启动子构建成融合基因和该基因的反义RNA基因，并通过农杆 菌介导法将这些融合基因导入棉花基因组中，使其超表达、花药特异表达或抑制棉 花同源基因的表达．以期创造出新的抗病、抗虫和转基因雄性不育系。 本研究取得的实验结果如下： 1．通过农杆菌介导的遗传转化方法将mant基因的上述三种转化结构成功导入棉 花基因组中，共获得转化植株66株。 2．分别以ⅣP71口和Ⅲd州基因序列设计引物，对获得的当代转基因植株进行PCR 率为50％，两对引物筛选的共阳性率为36．4％。 交阳性片段大小各异，多态性表明外源基因在棉花基因组中整合位点不同，转基因 切，都可见预期大小的内部片段，并且初步证明棉花基因组存在mant同源序列。这 些结果均表明外源基因确已经整合到棉花基因组中。 4．对转基因当代植株进行生育特性考查，在育性方面并未表现出与对照有明显 差别，抗虫、抗病特性以及雄性不育性的转基因植株有待从T1代转基因群体中进行 筛选、鉴定。 关键词：棉花；遗传转化；甘露糖基转移酶基因 型竺!苎里量叁堡垄苎里望塑!!窒 一—— Abstract from thianala．Itis cloned ArabidopsArabidopsis transferase(mant)is Maunosyl inthe the exists believedthat Mannosyltransferase(mant)universally geneencoding all and of prokaryoticorganisms．ItscodingproductMannosyl genomeseukaryotic from dolichol toform transferasetransfersmaunoseGDT-mmmoseto monophosphate dolichol servesasadonorof residues phosphatemannose(dol—P—man)，whichmannosyl onthelumenalsideofthe reticulumtO endoplasmicleading membrane of