慢病毒颗粒细胞感染实验用户手册.PDFVIP

慢病毒颗粒细胞感染 实验用户手册 1 慢病毒概述 1 2 慢病毒颗粒的储存、稀释与使用 1 3 慢病毒颗粒的使用安全及注意事项 1 4 实验前的准备工作 3 5 慢病毒颗粒滴度单位换算及MOI值计算 4 6 慢病毒颗粒感染目的细胞预实验 6 7 摸索细胞的最适药物筛选浓度 9 8 实验体系的放大和正式实验 13 9 常见问题 （FAQs ） 14 10 附：慢病毒颗粒的滴度复核 16 11 附：细胞MOI值参考列表 19 提示： 如您已熟悉慢病毒基本概念及MOI摸索设置，可快速转 跳至第6页阅读实验步骤。 概 述 慢病毒属是逆转录病毒科下的一个属，特征是需要较长时间才能培养。慢病毒载 体可以将外源基因有效整合到宿主染色体，从而达到持久性表达，对于较难转染 的多种细胞如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞、 非分化细胞等，均能极大提高目的基因的转导效率，具有广阔的应用前景。 GeneCopoeiaTM慢病毒载体相关产品有慢病毒表达克隆、即用型慢病毒颗粒、慢 病毒包装及检测相关试剂盒。其中，GeneCopoeiaTM提供的HIV骨架慢病毒表达系 统由第三代慢病毒载体系统优化所得，具有增加病毒颗粒滴度并加强生物安全性 的特点。 慢病毒颗粒的储存、稀释与使用 1. 收到病毒颗粒后，建议马上存放于-80 ℃，一般慢病毒颗粒可在-80 ℃存放约 6- 12月。如收到后需马上使用，可将当次需要的用量存放于4 ℃，并在3天内用 完。如保存6个月后使用，请重新检测病毒滴度。 2. 使用慢病毒颗粒时，可从-80 ℃冰箱取出，冰浴融化，置于4 ℃备用，并尽快使 用。如需要稀释慢病毒颗粒时，可用培养基(含血清或含双抗的培养基不影响病 毒感染)进行稀释。 3. 慢病毒颗粒每次冻融会降低大约50%滴度；因此在慢病毒颗粒使用过程中，应 避免反复冻融。GeneCopoeiaTM提供的慢病毒颗粒已分装为每管50uL （对照慢 病毒颗粒为每管25ul ）的规格，使用方便，省略了二次分装的滴度损失或其它 麻烦。可根据具体实验设置，分次取用合适量的慢病毒颗粒。 慢病毒颗粒使用的安全性 GeneCopoeiaTM提供的慢病毒颗粒属于假病毒，其毒性基因已被剔除并被外源性 目的基因取代，在感染宿主细胞后，将不会继续感染其他细胞，也不会利用宿主 细胞产生新的慢病毒颗粒。 慢病毒仍然具有潜在的生物学危险，建议不要使用编码已知或可能致癌的基因制作慢病毒。 如有疑问，请与我们联系。(联系电话：4006-020-200) 1 Tel: 4006-020