肠道病毒71型的快速纯化及其鉴定.pdfVIP

国际检验医学杂志2012年4月第33卷第8期 IntJLabMed，April2012，Vo1．33，No．8 · 897 · · 基础实验研究论著 · 肠道病毒 71型的快速纯化及其鉴定 胡小云，朱 冰△，王长兵，邝 璐 ，肖密丝 (广州医学院附属广州市妇女儿童 医疗 中心实验室 s10120) 摘 要：目的 建立一种简单、快速有效的从细胞培养物中纯化肠道病毒 71(EV71)的方法。方法 EV71病毒在恒河猴肾 细胞 (LLC—MK2)中增殖后 ，将获得的细胞培养物经反复冻融、聚乙二醇 6000沉淀、超速离心、氯化铯垫层超速离心的方法纯化病 毒。用聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS)、免疫印迹 (westernblot)和透射 电镜 (TEM)的方法对纯化病毒进行鉴定，并测定其感 染性 的滴度及 回收率 。结果 SD PAGE显示 出3个条带 ，相对分子质量分别为3．6×10、3×10。和 2．6X10。与EV7l的VP1、 VP2和 VP3相符合 。Westernblot证实为EV71特异性条带。经磷钨酸负染后 电镜观察，能看到典型病毒颗粒。采用终浓度为 1O 的聚 乙二醇 6000沉淀后 的病毒 的感染性 回收率为 82．0 ，再经氯化铯垫层超速离心后浓缩病毒 的感染性 田性率为 29．0 。 结论 聚 乙二醇 6000沉淀结合氯化铯垫层超速离心的方法比氯化铯密度梯度区带离心方法更简便，易于操作，并且 比单独聚乙 二醇 6000沉淀有更高的纯度，是一种简便、有效的病毒纯化方法。 关键词：肠道病毒 71型； 病毒纯化； 超速离心 DOI：10．3969／j．issn．1673—4130．2012．08．001 文献标识码 ：A 文章编号 ：l673—4130(2012)08—0897—02 Rapidpurificationand identification ofEenterovirus71 HuXiaoyun，ZhuBing ，Wang Changbing，KuangLu，XiaoM isi (CentralLaboratory，GuangzhouWomenandChildrensM edicalCenter，GuangzhouM edicalUniversity， GuangzhouGuangdong 510120，China) Abstract：Objective Toestablishasimple，rapidandeffectivemethodtopurifyEnterovirus71(EV71)fromcellculture．Meth— ods EV71，propagatedinrhesusrenalcells(LLC-MK2cells)werepurifiedbyprecipitatingwithpolyethyleneglycol(PEG)6000， differentialcentrifugationandultracentrifugationwithcesium chloride(CsC1)cushion．Thepurifiedvirussampleswerefurtheriden— tiffedbysodium dodecylsulphate—polyacrylamidegelelectroph0resis(SDS)，W esternblotandtransmissionelectronmicro— scope(TEM)．Results SDSshowedthreeproteinstrapswithrelativemolecularweightsof3．6×10 ，3×10。and2．6X 10。 respectively，whichwereaccordingwiththeVP1，VP2andVP3ofEV71andcouldbeconfirmedbyW esternblot．Thetypicalvirus particlecouldbeobservedwithTEM ．Infectivityrecoveryofvirussamples，precipitatedb