yaxinbio recombinant trypsin 雅心重组胰蛋白酶.pdf

Scientific questions of peptide mapping analysis of protein/antibody 蛋白及抗体肽图分析中的科学问题 Suxia Li Shanghai Yaxin Biotechnology Ltd Co. YAXINBIO Regulations 法 规 要 求 Page 2 YAXINBIO Regulations 法 规 要 求 Page 3 YAXINBIO 肽图分析面临的问题 Page 4 YAXINBIO 前处理—变性、还原要点 Page 5 YAXINBIO 前处理—酶切体系要点 Page 6 YAXINBIO 前处理思考要点汇总 抗体/蛋白 变性是否充分？ 酶切时抗体/蛋白是否仍保持一致的非折叠状态，对于肽图分 析的重现性至关重要。 同时重视工具酶trypsin的作用条件和稳定性条件，是另一 个重要的前提。 Page 7 YAXINBIO USP—peptide mapping 还原条件下， 酶切80% Page 8 YAXINBIO USP—peptide mapping 6M 盐酸胍变性 2M 尿素中酶切变性 G25脱盐柱 室温酶切 Page 9 18-20h YAXINBIO USP—peptide mapping Questions: 1) Different buffer for denaturing (6M GuHCl) and for digest (2M urea) 2) Mode for buffer changing: G25 column 3) Digestion time: 18-20h in room temperature Page 10 YAXINBIO MS鉴定与UV放行 1) MS鉴定：比如你有100ug蛋白，酶切了50ug，足以在肽 图上找到所有的肽段和后修饰，那么剩下的50ug没切开也没 事，所以看到waters 、国外药企发的文章一般都是酶切4-5小 时，酶切过久你也看到会增加翻译后修饰的比例，对于鉴定 来说是不利的。 2) UV放行，不看后修饰也不看覆盖率，要的是UV图谱与药 典标准图谱的比对。这是要保证1