再换算为蛋白质含量的凯氏定氮法.ppt

操作方法 1、制作标准曲线 取两组测定的A560值的平均值，即A560为纵坐标，蛋白质 浓度为横坐标，绘制标准曲线。 2、样品测定 福林-酚法（双缩脲法的发展） 两步反应 (1)在碱性条件下，蛋白质(肽键）与铜离子作用生成蛋白质—铜络合物。 (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(Ｆolin试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物) （A750)。 杜马斯法（燃烧法） 样品在高温下（700-800℃）燃烧，释放的氮 气由带热导检测器（TCD)的气相色谱仪测定。测得 的含氮量转换成样品中的蛋白质含量。 几种蛋白质测定方法比较 凯式定氮法 双缩脲 杜马斯 福林-酚 原理 装置 溶剂 时间 灵敏度 干扰 总氮量 蛋白氮 总氮量 蛋白氮 凯式定氮装置 分光光度计 高温装置、GC 分光光度计 浓硫酸 用量较少 不需要 福林-酚试剂 长 简单快速 3min 简单快速 较低 低 高 高 较小 有干扰 较小 酸类及柠檬酸类 氨基酸态氮的测定 氨基酸态氮的测定 双指示剂甲醛滴定法：原理、试剂、测定方法、结果计算、说明 电位滴定法：原理、试剂、仪器、测定方法、结果计算 一、双指示剂甲醛滴定法 氨基酸本身有碱性-NH2基，又有酸性-COOH 基，成中性内盐，加入甲醛溶液后，与-NH2结 合，碱性消失，再用强碱来滴定-COOH基。 双指示剂：百里酚酞+中