dna变性与复性.ppt

分子生物学 DNA变性、复性及应用 三峡大学生物与制药学院 李晓玲 Introduction 高温使DNA复制过程发生紊乱 ,致使DNA变性, 增加基因突变频率，增大癌症发生几率 Introduction 1.什么是DNA变性？哪些因素使DNA变性？ 2.DNA变性后能否复性？什么是复性？ 3. DNA变性和复性有哪些应用？ DNA变性、复性及应用 DNA Denaturation,Renaturation and Application DNA变性(denaturation)：指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象 1.DNA Denaturation 氢键断裂 碱基堆积力破坏 一级结构未改变 DNA Denaturation factor 高热：温度升高到90~100℃时 酸和碱：pH值低于3或高于10时 化学试剂：如尿素、甲酰胺、甲醛及有机试剂甲醇、丙酮等 增色效应（Hyperchromic effect ）： ————指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应 Hyperchromic effect 解链温度（Tm, melting temperature）：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度, 与（G＋C）%含量成正相关———— Tm, melting temperature DNA复性(renaturation)：指变性DNA在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象 它是变性的一种逆转过程。热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为退火(annealing)。 2.DNA renaturation 2.DNA renaturation DNA复性作用机制包括 成核作用（nucleation）和拉拉链作用（zippering） PCR (polymerase chain reaction，多聚酶链式反应)技术、核酸杂交技术与探针技术等 PCR技术：是一种体外大量扩增特定DNA片段的技术， 基于DNA的变性和复性原理，类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物，经由高温变性—低温退火—中温延伸三个基本步骤若干个循环后，DNA扩增2n 倍 3. Application ①94℃Denaturation; ②54 ℃ Annealing; ③ 72 ℃ Extension PCR PCR Application Kary B. Mullis 因PCR技术获得了1993年的诺贝尔生理医学奖 刑侦技术 生物进化 遗传疾病的诊断 检测艾滋病毒 亲子鉴定 可以检测PCR技术对食道癌等从基因水平进行诊断 1.什么是DNA变性？DNA变性后发生哪些变化？ 2. 什么是DNA复性？ DNA复性机制是什么？ 3. DNA变性和复性有哪些应用？（课外查阅资料） Conclusion