家畜传染病学实验指导：猪气喘病的诊断和治疗 .docVIP

实验十九 猪气喘病的诊断和治疗 目 的 掌握猪气喘病的诊断和治疗方法 内容及方法 猪气喘病的诊断方法 猪气喘病的诊断方法有两种，一是根据临诊诊断和病理学诊断，二是实验室诊断。 (一)临诊诊断和病理学诊断 1．临诊诊断 本病在临床上主要表现咳嗽、呼吸增数和喘气。按病程经过，可分为急性、慢性和隐性。以慢性和隐性最为常见。 I 急性 突然发病，精神不振，呼吸次数增加，呼吸困难，呼吸音数米外可闻，犬坐姿势。咳嗽次数少而低沉，体温正常，采食减少或不吃，病程约一周左右，以怀孕母猪、哺 乳母猪和小猪发病较多，小猪病死率较高。 慢性 病猪长期咳嗽，多发生在清晨、晚间、运动后或进食后。咳嗽时病猪站立不动，颈伸直，头下垂，严重者呈连续的痉挛性咳嗽。随着病程发展出现喘气，呼吸时呈腹式呼吸，病期较长的小猪，生长发育停滞，成为僵猪。病程最长可达半年以上。 隐性 在老疫区和患猪在良好的饲养管理条件下，以隐性为主。仅有轻度咳嗽或无可见症状，往往在屠宰和X线检查时才发现病灶。 2．病理学诊断 猪气喘病剖检时特征性病变见肺的心叶、尖叶、中间叶和膈叶前下缘出现淡红色或灰红色肺尖实变区，界限分明。随着病程发展病变部颜色与胰腺相似，有“胰变”之称。肺门和纵膈淋巴结肿大，其他脏器无病变。 X线检查对本病的检疫有重要价值，特别是隐性感染猪和未出现症状时早期诊断。检查 时如感染的猪在肺野的内侧区及心膈角区呈现不规则的云絮状渗出性阴影，边缘模糊，肺 野外围区无明显变化。 (二)猪气喘病的实验室诊断 1．病肺触片检查 取病猪的肺尖病灶与健康肺组织交界处的切面，用玻片制成触片， 干燥后，用甲醇固定2～5min，用pH7．2的磷酸盐缓冲液稀释20倍的姬姆萨氏染色3h，冲洗，干燥后立即用丙酮浸洗一次后镜检。可见到深紫色球状、杆状、轮状、两极形、伞状 等多形态微生物。一般于细支气管上皮细胞绒毛部位较易找到。 2．病原体分离培养 支原体在人工培养基分离较困难，对营养要求较苛刻。目前国内 常用的有江苏Ⅱ号培养基；Eagle液50％，1.7％水解乳蛋白磷酸缓冲液29％、酵母浸出液l％，醋酸铊0．125g／L，0．002％酚红和每毫升青霉素1 000单位。用灭菌的6号玻璃滤器过滤后，分装备用。健康猪血清经灭能后，经细菌滤器过滤后，按20％比例混合人培养基，校正pH7.4～7.6。 分离方法，取特征病变肺的边缘，与肺炎连结处的肺组织剪下1～2块芝麻粒大小，用 Hanks液洗一次后即浸泡于培养基中，培养48h，当培养基pH发生明显变化，并呈现均等 浑浊时，应将上述培养物以1：5接种量继续传4～5代后，再以1：10接种量继代，通常 传6～7代后，即可直接涂片染色镜检(染色方法同1)。 3.猪气喘病微量间接血凝试验 本法用于猪气喘病的群体检测和个体诊断。 材料准备 (1)抗原 冻干的10％抗原敏化红细胞，用时用；／15mol／L、pH7.2的PBS稀释成2％。 (2)标准阳性血清，阴性猪血清，用时先用PBS稀释成2.5倍。健康兔血清。 (3)10％戍二醛化红细胞，用时经轻度低速离心，取红细胞沉淀，用PBS稀释成2％悬液。 (4)被检血清的处理 被检血清先经56℃30min灭能，每0.2ml被检血清加0.1m12％ 戍二醛红细胞，37℃吸收30min。经低速离心或自然沉淀后，上清液即为2.5倍稀释血清， 供检验用。 (5)Ⅴ型72孔微量滴定板、微量振荡器、微量移液器，载量为0.025ml的微量稀释棒1~2套（每套12 支）。 （6）稀释液 含1%健康兔血清的1/15mol/LpH7.2的PBS。 1/15mol/L，pH7.2PBS配制： Na2HPO4 17.19g KH2PO4 2.54g NaCL 8.5g 蒸馏水 加至1000ml。 操作方法 （1）被检血清、阳性对照血清、阴性对照血清、抗原对照。各占一横排孔。用微量移液器每孔加0.025ml稀释液。 （2）血清稀释 微量稀释棒先在稀释液中预湿，经滤纸吸干，再小心蘸取被检血清，放在第一孔中。可以同时稀释11份血清。以双手合掌迅速移动11根稀释棒约60次，然后将11根稀释棒小心平移至第2孔，搓转入第1孔，再移至第3孔（被检血清可以只测到第3孔即稀释到1：20）。对照血清必须稀释到第6孔。 （3）2%抗原敏化红细胞，经摇匀后用微量移液器滴加到各孔，每孔0.025