家畜传染病学实验指导：鸭瘟的诊断 免费.docVIP

实验三十三 鸭瘟的诊断 目 的 掌握鸭瘟的诊断程序和方法 内容及方法 鸭瘟是由疮疹病毒引起鸭、鹅的一种急性败血性传染病。根据流行特点和特征性临床 症状和病理变化可作出诊断，进一步确诊须进行病毒分离和鉴定。 一、鸭瘟临诊诊断的要点， 流行病学诊断 不同品种和年龄的鸭均可感染鸭瘟；在自然流行中成年鸭发病和死 亡较为严重，1月龄以下鸭发病较少，但人工感染雏鸭时也易感，死亡率也很高。鹅也能自 然感染发病。本病流行多发生在低洼水网地区。本病一年四季都可发生，一般以春、秋流行较严重。 临床症状和病理学诊断 本病的潜伏期一般为3～4天，人工感挚为2～4天。病初体温升高43℃以上，呈稽留热。随着病鸭渴欲增加，精神萎顿，不久两腿麻痹，行走困难， 爬伏地上，强行驱赶时，则两翅扑地而行，走不了几步又蹲伏地上。另一特征，病鸭流泪、 眼睑水肿，部分病鸭头颈肿胀，俗称“大头瘟”，并排出草绿色稀粪。泄殖腔粘膜水肿、充血、出血，严重者外翻，；翻开肛门可见泄殖腔粘膜有黄绿色假膜，不易剥离。具有诊断意义的病变，食道粘膜上成纵行排列的灰黄色假膜，假膜易剥离，剥离后粘膜留有溃疡。泄殖腔粘膜的病变与食道相同，但假膜不易剥离，剥；离后粘膜上有出血斑和水肿。头颈肿大的病例，皮下组织有黄色胶样浸润。肝和胃肠制成切片经组织学检查，见肝细胞和胃肠粘膜上皮细胞有核内包涵体。 二、鸭瘟的实验室诊断 1．病毒的分离和鉴定 (1)病料采集和处理 取病鸭或刚死亡鸭的肝脏或脾脏，置消毒的研▲内，、研磨碎后 用磷酸缓冲液或灭菌生理盐水作1：10稀释，经3 000r／min离心20min，取上清液，按每毫升加青霉索和链霉素各1 000单位，置室温60min。 (2)病料的接种 将上述处理好的病料接种于10—14日龄鸭胚，每胚尿囊腔内接种 0.2ml，置37t继续孵育。鸭胚接种后3—6天有部分鸭胚死亡，见胚体全身出血，一般盲代2～3代后鸭胚死亡较规律。 (3)病毒的鉴定 鸭胚死亡后收葫蒸艇胚液，、采用血清中和试验进行病毒的鉴定。其 方法是：取上述分离病毒的鸭胚液(1：100稀释)0.5ml与已知抗鸭瘟血清0.5ml混合，置室温感作30min后，将混合液接种入已长好鸭胚成纤维细胞培养管内，每管滴入2滴 (0.05m1)，置37℃作用60min，然后将混合液吸出加入维持液，在37℃继续培养。并设立 阴性血清和空白对照。结果判定，接种后观察4天，若阳性血清与分离的病毒不出现细胞病变，即认为是鸭瘟病毒，如果出现细胞病变则不是鸭瘟病毒。阴性血清对照组应出现细胞病变；空白对照不应出现细胞病变。病毒鉴定也可用雏鸭作中和试验，将分离的病毒与已知抗鸭瘟血清等量混合，置37℃感作60min后，接种于健康雏鸭(无鸭瘟抗体)，每只鸭肌肉注射0.1ml，观察10天，如试验组鸭均健活，对照组鸭死亡，也证明分离的病毒是鸭瘟病毒。 2． 荧光抗体的检查 (1)抗鸭瘟血清及荧光标记 将鸭瘟致．弱病毒与弗氏完全估剂按1：1混合，皮下注射 成年鸭，6周后采血分离血清，用50％硫酸铵沉淀提取IgG，并标记上异硫氰酸荧光素，再 通过葡聚糖柱提纯，用肝粉吸收。最后在pH7.2 0.01molPBS4℃透析过夜。 (2)鸭胚成纤维细胞 将细胞培养瓶内放人盖玻片，待盖玻片上细胞长成单层后，倾出培养液，接种人病鸭肝悬液(1：10)，在37℃作用60min后，倾出接种物，并用Hcmks液洗一次后，加入维持液，在37℃继续孵育。 (3)荧光染色 将感染病毒24h的细胞培养物取出，干燥后浸入丙酮固定5min，取出立即浸入PBS洗去残留丙酮。待干后将培养物的盖玻片放在清洁的玻片上，取标记的荧光 抗体2～3滴，覆盖于细胞培养物上，平放在湿盒内置37℃30min，然后在3杯PBS中荡洗， 每杯3～5钟，将多余荧光抗体洗掉。 (4)镜检 在玻片细胞培养物上滴加缓冲甘油封片，在荧光显微镜下观察。若阳性者在细胞培养物上见有特异性荧光。应设立阴性材料作对照。 复习题与作业 1．简述鸭瘟临床症状和剖检变化的特征。 2．在鸭瘟的诊断中应注意什么问题?