taqman多重实时荧光定量pcr检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤 - 生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（４）：６６７３ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 Ｔａｑｍａｎ多重实时荧光定量ＰＣＲ检测裸鼠肿瘤转移 模型中肿瘤转移率方法的建立 张　宇　白　豆　朱乃硕 （复旦大学 生命科学学院遗传工程国家重点实验室　生物医学研究院　微生物与分子免疫学研究室　上海　２００４３８） 摘要　目的：建立基于多重荧光定量ＰＣＲ技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效 检测的方法。方法：以人和小鼠的 ２ｍ基因为目标，设计相应的引物和Ｔａｑｍａｎ探针；分别抽提人 β 涎腺腺样囊性癌ＡＣＣ细胞和小鼠Ｓｐ２／０细胞的基因组ＤＮＡ作为模板，建立两物种双重荧光定量 ＰＣＲ检测方法，且分别以人和鼠定量基因检测为参照考察双重荧光定量ＰＣＲ方法的特异性、灵敏 性和精确性，并与传统转移灶称重计算肿瘤转移率的方法进行比较。结果：双重Ｔａｑｍａｎ实时荧 光定量ＰＣＲ检测方法具有很好的特异性和较高的灵敏度（０．００６ｎｇ／ｌＤＮＡ），重复性较好（批间 μ 平均ＣＶ＝０．０３６），有较强稳定性，比传统称重法更高效，更准确。结论：双重荧光定量ＰＣＲ能够 在同一反应体系下同时对动物组织中人肿瘤转移灶和周围组织进行快速准确的定量检测，计算 出肿瘤转移率，具有经济、快速、特异性强等优点，在肿瘤动物模型肿瘤转移率检测方面具有很高 的应用价值。 关键词　多重荧光定量ＰＣＲ　肿瘤转移率　涎腺腺样囊性癌 中图分类号　Ｑ８１９ 　　Ｔａｑｍａｎ实时荧光定量 ＰＣＲ技术（ＴａｑｍａｎＲｅａｌ 　　ＰＣＲ方法在检测恶性肿瘤的转移性特征等方面 ｔｉｍｅｑＰＣＲ）应用寡核苷酸探针与引物扩增区段内的模 的应用多年来一直是肿瘤研究与临床诊断的热 板序列发生特异性杂交，在ＰＣＲ反应的延伸过程中，标 ［７９］ ［８］ 点 。早在 １９９８年，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等 就曾用 ＰＣＲ的 记在探针５′端的荧光报告基团（Ｒｅｐｏｒｔｅｒ）被水解脱落， 方法检测了人类前列腺癌的微转移。２００３年 Ｂａｋｅｒ 与３′端的荧光淬灭基团（Ｑｕｅｎｃｈｅｒ）分离并发射荧光。 ［９］ 等 应用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时荧光定量ＰＣＲ技术对乳腺 ［１５］ 起始模板浓度越高荧光信号越强 。多重ＰＣＲ技术 癌进行了较灵敏的临床检测。本文研究涉及到的涎 （ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ）是在同一ＰＣＲ反应体系里用多对引物 腺腺样囊性癌（Ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＡＣＣ）是一 ［６］ 同时对多个 ＤＮＡ模板进行扩增 。多重荧光定量 种死亡率较高的口腔恶性肿瘤，易发生肺转移，早先 ＰＣＲ技术则是将多重 ＰＣＲ技术与实时荧光定量 ＰＣＲ 有文章报道其肺转移率可达９６％［１０１４］。因此，精确 技术结合在一起的新型检测技术，可以在同一反应体 检测该肿瘤的转移率对其临床诊断与治疗就显得尤 ［２］ 系内对多个基因模板进行定量检测 。 为重要。 　　以往在肿瘤转移动物实验模型的研究中，对肿瘤 收稿日期：２０１４１０１９　　修回日期：２０１５