大豆胰蛋白酶抑制剂bowman-birk 基因家族新等位变异分析 - 中国科学.pdf

中国科学 C 辑 :生命科学 2008 年 第 38 卷 第 6 期 : 536 ~ 541 www. scichina. com life. scichina. com SCIENCE IN CHINA PRESS 大豆胰蛋白酶抑制剂Bowman-Birk 基因家族 新等位变异分析 ①② ② ①* 王跃平 , 陈雄庭 , 邱丽娟 ① 国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程/农业部作物种质资源与生物技术重点开放实验室, 中国农业科学院作物科学研究所, 北京 100081; ② 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海口 571101 * 联系人, E-mail: anatomy@ 收稿日期: 2007-03-12; 接受日期: 2007-12-12 国家高技术研究发展计划(批准号: 2006AA100104 和 2006AA10A110) 、国家自然科学基金重大项目(批准号:、国家“十一五”科 技支撑课题(批准号: 2006BAD13B05)和中国农业科学院作物科学研究所基本科研业务费专项资助项目 摘要 大豆胰蛋白酶抑制剂主要有 Kunitz 型胰蛋白酶抑制剂(KTi)和 关键词 Bowman-Birk 型胰蛋白酶抑制剂(BBI). BBI 家族已经克隆的有 BBI-A, 大豆(Glycine max) a b c d e f Bowman-Birk 蛋白酶抑制剂(BBI) BBI-C 和BBI-D 三类抑制剂, 而KTi 型家族包含有Ti , Ti , Ti , Ti , Ti , Ti , Tis 和ti 共8 个多基因共显性控制单位点的多态类型及KTi1/2, KTi3 等成员. Kunitz 蛋白酶抑制剂 (KTi) 同源比对 本研究对大豆品种“绥农14”鼓粒期籽粒cDNA 文库随机测序, 组装出的175 聚类 个contigs(或singletons), 大豆胰蛋白酶抑制剂有关的contigs 有17 个, 其中 等位变异 12 个序列组装成的4 个contigs, 如contig5, contig35, contig8 和contig9 分别 与BBI 家族成员BBI-A1, BBI-A2, BBI-C 和BBI-D 有关, 序列之间的相似性 达到 98以上, 均包含完整的可读框(ORF), 并且存在新的等位变异, 通过 cDNA 和基因组PCR 扩增, 克隆了BBI 家族4 个成员, 证实了新等位变异 的存在. 通过比较分析籽粒形成时期的cDNA 文库, 发现大豆胰蛋白酶抑制 剂基因表达随籽粒的发育和成熟而呈现由低到高变化趋势. 大豆、水稻、花 生、玉米和豇豆的 Bowman-Birk 蛋白酶抑制剂基因的序列聚类分析, 表明 禾谷类和豆科植物BBI 家族具有共同的祖先. 蛋白酶抑制剂(trypsin inhibitor)泛指具有抑制胰 家族研究较多[3]. 大豆胰蛋白酶抑制剂约有 7~10 种, 蛋白酶活性作用的一类物质, 其分子量一般比较小, 但主要的有两种类型蛋白酶抑制剂, 即Kunitz 型胰 20 世纪 40 年代后, 在豆科(Leguminae) 、禾本科 蛋白酶抑制剂(KTi)和Bowman-Birk 型胰蛋白酶抑制 (Gramineae)和茄科(Sol