减毒活疫苗四.ppt

1990年，Wolff等首次发现，给小鼠肌肉注射裸露质粒DNA后，质粒携带的基因可被肌细胞摄取并在其中表达，还可诱生特异性免疫应答。 四、核酸疫苗 核酸疫苗（nucleotide vaccine）：又称DNA疫苗（DNA vaccine），是将一种或多种目的抗原的编码基因克隆到真核质粒表达载体上；再将重组质粒直接注入到体内，在宿主细胞内表达目的蛋白，诱发特异性免疫应答。 四、核酸疫苗 目前进入临床试验的核酸疫苗有HIV DNA疫苗和疟疾 DNA疫苗。 四、核酸疫苗 由于核酸疫苗具有构建容易、生产方便、表达稳定及可诱发全面的免疫应答等特点，在抗感染、抗肿瘤免疫及疾病的预防等方面具有广阔的应用前景，被誉为疫苗的“第三次革命”。 四、核酸疫苗 局部注射的核酸（重组质粒DNA）被周围的细胞（如黏膜上皮细胞、抗原提呈细胞）摄取后，进入核内进行转录，并在胞质中翻译成目的蛋白。 1、免疫机制 四、核酸疫苗 目的蛋白被蛋白酶复合体降解成含有表位的抗原肽，可作为： ● “内源性抗原”：与MHCⅠ类分子结合，诱发CTL介导的细胞免疫应答。 ● “外源性抗原”：与MHCⅡ类分子结合，诱发偏向Th1型免疫应答。 四、核酸疫苗 目的蛋白亦可通过细胞分泌或细胞破裂的方式进入组织间，以天然折叠形式激活B淋巴细胞而产生抗体。 四、核酸疫苗 DNA疫苗接种后，体内仅表达pg～ng水平的外源蛋白，但能诱发强而持久的细胞免疫和体液免疫应答。 如何解释这一现象呢？ 四、核酸疫苗 目的基因（含载体质粒）含有CpG基序的回文序列，能激活较强的CTL效应，并能激活巨噬细胞与NK细胞，因此，CpG回文序列被称为免疫刺激DNA序列。 CpG基序与IL-2、TNF-β、IFN-γ的基因结构相似而产生协同作用。 四、核酸疫苗 2、构建与免疫 ①目的基因的选择：侧重于免疫原性，即所表达的目的蛋白刺激机体免疫应答的能力。目的蛋白中是否具有受MHC分子限制的T细胞抗原表位，是保证核酸免疫有效的先决条件。 四、核酸疫苗 核酸疫苗所选择的目的基因应尽量避免有害基因成分，特别是病毒或肿瘤的核酸免疫。 四、核酸疫苗 ②载体的选择：构建DNA疫苗的质粒通常是非复制型的真核表达质粒，能高水平地表达目的基因。 四、核酸疫苗 重组质粒可分为两个部分： ● 转录部分：由启动子、插入的目的抗原cDNA和poly A终止子组成，指导目的蛋白在体内表达，诱发特异性免疫应答。 ● 佐剂部分：CpG基序。 四、核酸疫苗 ③启动子的选择：质粒在宿主细胞内表达外源性蛋白的水平与调控DNA表达的启动子关系密切。表达水平的不同又直接影响免疫应答的强度和持续性。 四、核酸疫苗 ④DNA疫苗的优化 ● 联合构建：在载体质粒中插入2个或2个以上目的抗原基因，既能激活CD8＋T细胞产生特异性CTL，又能激活CD4＋Th2细胞产生体液免疫。  ● 协同构建：将目的基因与某种细胞因子的基因构建成嵌合基因，以促进目的基因的免疫效果。 四、核酸疫苗 ⑤免疫途径、剂量、时间：常见免疫途径有肌肉注射、皮内或皮下免疫、粘膜免疫等。 四、核酸疫苗 3、核酸疫苗与传统疫苗的比较 传统免疫所使用的抗原一般是灭活病原体、减毒的活病原体或病原体的亚单位蛋白。 核酸疫苗仅仅是病原体某种抗原的基因片段，可提供与天然构象极为接近的目的蛋白，提呈给宿主免疫系统，与自然感染过程相似。 四、核酸疫苗 核酸疫苗兼有重组亚单位疫苗的安全性和减毒活疫苗诱导全方位免疫应答的高效力。 四、核酸疫苗 灭活疫苗和亚单位疫苗在体内代谢较快，难以长时间维持较稳定的含量，需多次接种免疫原，加强免疫。 核酸疫苗可在体内不断翻译表达，较长时间维持较高的蛋白水平，免疫具有连续性，一次接种可获得长期或终身免疫力。 四、核酸疫苗 采用不同毒株之间的保守DNA序列作核酸疫苗，可使其免疫作用突破地理株的限制，从而有效地预防病原体极易发生变异的某些疾病（如丙型肝炎、甲型流感、艾滋病等）。 四、核酸疫苗 核酸疫苗与世界卫生组织儿童计划免疫长远目标（用一种疫苗预防多种疾病）相吻合，不仅能预防疾病，还可作为治疗性疫苗，治疗一些复杂难治的疾病，如病毒性肝炎、癌症等。 四、核酸疫苗 一、概述二