16 第十六章_抗生素类药物的分析.ppt

（二）杂质吸收度 （三）残留有机溶剂 四、 含量测定 HPLC法 盐酸四环素的测定 系统适用性试验：盐酸四环素、有关物质及ATC峰 间的分离度均应符合要求。 定量方法：外标法以峰面积计。 第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查 1.高分子杂质 分子量大于药物本身的杂质总称。如主要来自于发酵工艺可致敏的青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽；来源于生产、贮存过程中的自身聚合物等。 如聚合物 高分子杂质的分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶G-10（40～ 120μm）柱.HPLC系统:葡聚糖凝胶G-10柱. 内标法＋校正因子 外标法 特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测） 四、含量测定 反相高效液相色谱法 第三节 氨基糖苷类抗生素 链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、巴龙霉素等 链霉胍 链霉糖 N-甲基-L- 葡萄糖胺 链霉素 化学结构 绛红糖胺 2-脱氧链霉胺 加洛糖胺 N-甲基-3- 去氧-4-甲 基戊糖胺 庆大霉素 庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 　 性质： 碱性 多与硫酸成盐 溶解性 旋光性 4. 苷的水解和稳定性：酸性、碱性均易水解 链霉素pH5～7.5；庆大霉素pH2～12稳定 5. UV：链霉素:230nm、庆大霉素等无 二、 鉴别试验 茚三酮反应 （一） △ 羟基胺结构 （二）Molisch试验 具有五碳糖或六碳糖结构 H+ 糠醛或羟甲基糠醛 α-萘酚 蒽酮 红紫色 蓝紫色 N-甲基葡萄糖胺反应 （三） 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 樱桃红色 （Elson-Morgan反应） (缩合) 乙酰丙酮 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 樱桃红色 麦芽酚反应 （四） 链霉糖特有反应 H+ 分子重排 紫红 麦芽酚 链霉胍特有反应 （或α-萘酚） 8-羟基喹啉 坂口反应 （五） 橙红色化合物 （六） 反应 H+ IR法 （八） 庆大霉素无UV吸收 （七） 色谱法：TLC法和HPLC法 UV法 光谱法： 三、 特殊杂质检查及组分分析 链霉素杂质 （一） 链霉素B（甘露糖链霉素） 方法 TLC中的对照品法 1. 来源 反应中间体 对微生物的活性无明显差异 毒副作用和耐药性不同 发酵菌种不同 工艺差别 C组分比例 不一致 规定控制各组分的相对百分含量 ChP USP BP JP 庆大霉素C组分的测定 （二） ChP（2010）采用蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分，以C18作固定相；0.2mol/L三氟乙酸－甲醇作流动相，小诺霉素作内标，考察系统适用性 USP荧光衍生化后紫外测定 （三）硫酸盐测定：剩余EDTA络合滴定法或HPLC法 ChP（2010）中硫酸依替米星中硫酸根离子的测定采用HPLC法-蒸发光散射检测器 四、含量测定 微生物检定法 各国药典主要采用 HPLC法 常用于体内药分 第四节 四环素类抗生素 A B C D 一、 结构与性质 酸碱性与溶解度 （一） 1. 与酸、碱均能成盐 2. 强酸或强碱中溶解度↑ 3. 吸湿性 多含结晶水 酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性 与金属离子生成有色配位化合物 Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV和荧光 （三） 与金属离子络合 （四） pH3 ~ 7.5 荧光 旋光性 （二） 稳定性 （五） 1. 差向异构化 差向四环素 （土霉素、多西环素不易差向异构化） 2. 降解反应 （1）酸性下降解 λmax = 445nm λmax = 435nm 橙黄色 脱水四环素 ～ ～ TC ETC ATC EATC ＜ ＜ （2）碱性下降解 （荧光） 2、TLC法 1、HPLC法 ：加入EDTA，克服痕量金属造成的拖尾现象 二、鉴别试验 3、IR光谱法 4、UV光谱法 5、显色法，与H2SO4反应显色 6、FeCl3反应：酚羟基的特征反应 三、 特殊杂质检查 4-差向四环素（ETC） 脱水四环素（ATC） 差向脱水