实验性自身免疫性重症肌无力模型构建方法进展.pdf

·428 · 中国免疫学杂志2016年第32卷 doi:10.3969/ j.issn.1000鄄484X.2016.03.030 实验性自身免疫性重症肌无力模型构建方法进展淤 许骏尧摇 陈以狄摇 程摇 杨摇 孙佳玥摇 朱摇 洁摇 吴颢昕摇 (南京中医药大学基础医学院,南京 210046) 摇 摇 中图分类号摇 R332摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 文章编号摇 1000鄄484X(2016)03鄄0428鄄04 摇 摇 重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是在细胞 期地稳定地产生抗体,故需多次用AChR免疫动物, 免疫依赖性补体参与下,由乙酰胆碱受体抗体(Ace鄄 因而实验周期较长,不适合短期研究。 tylcholine receptor antibody,AChR Ab)介导而产生的 1郾2摇 利用人免疫球蛋白转基因小鼠构建EAMG模 自身 免 疫 系 统 疾 病。 位 于 神 经 肌 肉接 头 [3] 型摇 Lonberg等 在1994年建立了表达人免疫球蛋 (Neuromuscular junction,NMJ)处的 AChR 是导致 白(Immunoglobulin,Ig)的转基因小鼠,用不同免疫 MG的自身免疫抗原。 其发病原因及治疗方法仍有 原接种此种小鼠后,均可产生针对该免疫原的人源 待进一步研究探讨,所以研究实验性自身免疫性重 [4] 性抗体。 李红花等 参照其方法成功构建含有人 症肌无 力 动 物模 型 (Experimental autoimmune Ig滋、酌1和资胚系基因的转基因小鼠,并将由电鳐电 myasthenia gravis,EAMG)十分有必要。 1973 年 器官提纯的AChR 与CFA 一起于第0、3、5 周皮下 [1] Patrick等 首次从电鳗电器官提取纯化AChR免疫 注射该小鼠。 3周后小鼠出现肌无力症状并产生了 家兔后建立了EAMG模型。 随着研究深入,越来越 人抗AChR抗体,且滴度与MG患者相似。 由于采 多建模方法被应用到MG动物模型上。 本文对国内 用了人Ig转基因小鼠,其产生的抗体均为人源性抗 外各种建模方法综述如下。 体,这使得本法构建的EAMG模型在免疫学上更接 近人MG。 本法目前属于一种新的尝试,国内外文 1摇 提纯电鳐乙酰胆碱受体构建EAMG模型 献较少。 1郾1摇 经典方法摇 相比国外多从加利福尼亚电鳐电 2摇 被动免疫法构建EAMG模型 器官中提取 AChR,在中国多选用较易获得的国产 2郾1摇 用MG患者血清及血清内成分建立被动转移 [2] 电鳐。 Wang等 利用亲和层析技术从国产电鳐电 [5] 模型摇 高波廷等 收集未使用过激素治疗的AChR 器官中提纯AChR蛋白后,与弗氏完全佐剂(CFA) Ab 阳性和阴性的MG患者血液,分离血清后以每次 混合成油包水乳剂,于第 1、4 周分别对 Lewis 大鼠 0郾8 ml注射小鼠,连续7 d,并且为了避免小鼠对人 足垫、腹部及背部皮下进行多点注射,5周后大鼠开 血清蛋白产生免疫反应,在初次注射血清后24 h再 始出现渐进性肌无力表现。 腹腔注射环磷酰胺300 mg/ kg。 两组小鼠均出现肌 该方法证明外源性AChR(国产电鳐 AChR)可 [6] 无力症状及肌电图衰减。 此外,Burges等 将纯化